轉化生長因子β1基因多態(tài)性與煤工塵肺關系研究.pdf

1、塵肺病是目前我國職業(yè)病中發(fā)病率最高、死亡危險性較大、對勞動者危害最嚴重的一類疾病，據(jù)統(tǒng)計目前我國塵肺病例約占職業(yè)病患者總人數(shù)的近三分之二。塵肺發(fā)病機制十分復雜，迄今為止尚難以圓滿解釋其發(fā)生過程，對其發(fā)生發(fā)展起關鍵作用的分子機制尚不清楚，也缺乏對其根治或阻止進展的方法。因此，控制塵肺病的關鍵是預防。及時檢出易感者即高危人群，限制其從事粉塵作業(yè)是重要的預防措施之一。塵肺病個體易感因素，特別是遺傳因素研究在國際范圍內(nèi)已經(jīng)受到重視。 目

2、前國內(nèi)外研究者認為多種細胞因子在肺纖維化形成過程中發(fā)揮著重要作用，其中轉化生長因子β1(TGF-β1)的作用尤其受到重視。TGF-β1可能通過上調(diào)膠原和纖維粘連蛋白基因表達促進細胞外基質(zhì)的增多，并可能通過降低蛋白酶分泌和增加蛋白酶抑制劑的分泌抑制基質(zhì)的降解，從而參與肺組織的纖維化過程。研究資料提示TGF-β1基因啟動子區(qū)-509位點存在多態(tài)性(C＞T)，而且有報道稱TGF-β1基因多態(tài)性與TGF-β1蛋白的分泌量及罹患某些疾病的危險度相

3、關。此研究以中國河南省漢族煤工塵肺患者110例和煤塵接觸者110例為調(diào)查對象，分別采集外周靜脈血、提取全血DNA，采用聚合酶鏈反應-限制片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術對調(diào)查對象的TGF-β1基因-509位點的多態(tài)性進行檢測，并用ELISA試劑盒檢測調(diào)查對象的血清TGF-β1濃度。目的是初步探討TGF-β1基因-509位點的多態(tài)性在煤工塵肺發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用，以及TGF-β1基因-509位點的多態(tài)性與血清TGF-β1濃度之間

4、的關系。通過研究，期望對于闡明基因多態(tài)性與煤工塵肺等塵肺病的遺傳易感性關系提供相關線索和參考依據(jù)，為進一步加強和改進粉塵危害早期預防和控制措施提供新的思路和手段。 調(diào)查對象與方法一、調(diào)查對象煤工塵肺組：均由河南省焦作市職業(yè)病防治所按現(xiàn)行的《塵肺X線診斷標準》(GBZ70-2002)確診的河南省焦作市漢族男性煤工塵肺復診患者110例，無免疫系統(tǒng)疾病和其它肺部疾病，自愿合作。接塵工種均系掘進工和采煤工，粉塵類型為混合型。 煤

5、塵接觸組：在相同礦區(qū)選擇男性漢族有確切煤塵接觸史的掘進工和采煤工110例，結合粉塵作業(yè)健康檢查拍攝高仟狀X射線后前位胸片排除煤工塵肺，并排除免疫系統(tǒng)疾病和其它肺部疾病。 二、調(diào)查方法(一)問卷調(diào)查每位調(diào)查對象均接受問卷調(diào)查，內(nèi)容包括：個人一般情況、粉塵作業(yè)史、塵肺病診斷史、既往病史和家族史等。 (二)血樣采集和DNA提取全部研究對象取清晨空腹靜脈血6ml，3ml離心分離血清，4℃保存?zhèn)溆茫?ml用于提取全血細胞DNA，-

6、20℃保存?zhèn)溆谩?(三)TGF-β1基因多態(tài)性檢測通過DNA聚合酶鏈反應(PCR)對包含TGF-β1基因編碼區(qū)啟動子-509多態(tài)性位點的DNA片段進行擴增，限制片斷長度多態(tài)性(RFLP)分析技術鑒定其基因型。 (四)血清TGF-β1濃度的檢測采用雙抗體夾心ELISA法檢測血清TGF-β1濃度，實驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行。 (五)統(tǒng)計學分析應用Excel2000對全部調(diào)查和測定結果建立數(shù)據(jù)庫，SPSS12.0

7、軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。檢驗水準α=0.05。 結果一、調(diào)查對象一般情況煤工塵肺組110例，年齡33～79(58.96±11.52)歲，接塵工齡3～45(24.68±9.32)年；煤塵接觸組110例，年齡29～68(42.11±6.29)歲，接塵工齡1～34(16.96±6.23)年。兩組之間在年齡和接塵工齡分布不均衡(P＜0.05)。煤塵接觸組人群的基因型及基因頻率經(jīng)Hardy-Weinberg定律檢驗證實達到遺傳平衡(χ2

8、值為3.85，P＞0.05)。 二、煤工塵肺組和煤塵接觸組TGF-β1基因-509位點基因型分布比較 TGF-β1基因-509位點C/C基因型、C/T基因型、T/T基因型在煤工塵肺組和煤塵接觸組中的分布不平衡，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。采用分層分析法控制接塵工齡，計算各基因型患煤工塵肺的調(diào)整危險度：當接塵工齡小于20年時，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.27(0.11～0.67)；T/T+

9、基因型與T/T-基因型比較，OR值為5.69(2.09～15.51)。當接塵工齡大于20年時，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.35(0.14～0.86)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為1.25(0.52～2.98)。三、血清TGF-β1濃度檢測結果煤工塵肺組血清TGF-β1平均濃度為65.11±29.35pg/L，煤塵接觸組血清TGF-β1平均濃度為57.30±16.60pg/L，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(

10、P＜0.05)。 煤工塵肺組中及煤塵接觸組中不同TGF-β1基因-509位點基因型的血清TGF-β1濃度檢測結果均顯示：TGF-β1基因-509位點C/C基因型與C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；T/T基因型比C/C基因型、C/T基因型兩組血清TGF-β1的平均濃度高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不同年齡、不同接塵工齡、不同塵肺分期、吸煙者與不吸煙者的TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)

11、計學意義(P＞0.05)。 應用Excel2000對全部調(diào)查和測定結果建立數(shù)據(jù)庫，SPSS12.0軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。檢驗水準α=0.05。 結果一、調(diào)查對象一般情況煤工塵肺組110例，年齡33～79(58.96±11.52)歲，接塵工齡3～45(24.68±9.32)年；煤塵接觸組110例，年齡29～68(42.11±6.29)歲，接塵工齡1～34(16.96±6.23)年。兩組之間在年齡和接塵工齡分布不均衡(P

12、＜0.05)。煤塵接觸組人群的基因型及基因頻率經(jīng)Hardy-Weinberg定律檢驗證實達到遺傳平衡(χ2值為3.85，P＞0.05)。 二、煤工塵肺組和煤塵接觸組TGF-β1基因-509位點基因型分布比較 TGF-β1基因-509位點C/C基因型、C/T基因型、T/T基因型在煤工塵肺組和煤塵接觸組中的分布不平衡，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。采用分層分析法控制接塵工齡，計算各基因型患煤工塵肺的調(diào)整危險度：當

13、接塵工齡小于20年時，C/C+基因型與C/C基因型比較，OR值為0.27(0.11～0.67)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為5.69(2.09～15.51)。當接塵工齡大于20年時，C/C+基因型與C/C-基因型比較，OR值為0.35(0.14～0.86)；T/T+基因型與T/T-基因型比較，OR值為1.25(0.52～2.98)。 三、血清TGF-β1濃度檢測結果煤工塵肺組血清TGF-β1平均濃度為65.11±

14、29.35pg/L，煤塵接觸組血清TGF-β1平均濃度為57.30±16.60pg/L，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 煤工塵肺組中及煤塵接觸組中不同TGF-β1基因-509位點基因型的血清TGF-β1濃度檢測結果均顯示：TGF-β1基因-509位點C/C基因型與C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；T/T基因型比C/C基因型、C/T基因型兩組血清TGF-β1的平均濃度高，差異均有

15、統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不同年齡、不同接塵工齡、不同塵肺分期、吸煙者與不吸煙者的TGF-β1的平均濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 煤工塵肺組和煤塵接觸組之間相同TGF-β1基因-509位點基因型的血清TGF-β1濃度比較結果，C/C基因型、C/T基因型的血清TGF-β1的平均濃度兩組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但T/T基因型的煤工塵肺患者血清TGF-β1的平均濃度(88.81±23.33pg/L)高于煤塵接觸者

16、(68.94±11.83pg/L)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結論1.TGF-β1基因-509位點存在單核苷酸多態(tài)性，C/C基因型可能是一個煤工塵肺的非易感性基因型，而T/T基因型可能是一個易感性基因型。當接塵工齡小于20年時，T/T基因型攜帶者發(fā)生煤工塵肺的危險度可能較大；當接塵工齡大于20年時，隨接塵工齡延長，工人吸入粉塵的總量增多，粉塵自身的致病作用可能越來越強，TGF-β1基因-509位點基因型對煤工塵肺發(fā)生發(fā)