日本血吸蟲肝期童蟲表膜結合多肽的篩選與初步鑒定.pdf

1、目的：從噬菌體十二肽庫中篩選出與日本血吸蟲(Schistosoma japonicum,Sj)童蟲表膜特異性結合的多肽，為研究血吸蟲病的治療提供靶向分子。
　　 方法：利用噬菌體十二肽庫與Sj活童蟲靶分子之間的親和力結合，經(jīng)過三輪吸附-洗脫-擴增的篩選過程，從末次回收的結合噬菌體中隨機挑取20個陽性克隆，首先對其進行測序；隨后利用免疫組化、Western blot分析等方法觀察目標噬菌體在體外與童蟲表膜的結合能力，并通過動物實驗

2、將目標噬菌體回輸?shù)揭迅腥狙x的動物體內(nèi)，分別回收肝臟和血吸蟲童蟲，分別洗脫與肝臟和童蟲結合的噬菌體，進行統(tǒng)計學分析，驗證其靶向性。
　　 結果：經(jīng)3輪篩選后，噬菌體回收率從第1輪的0.77×10－8增加到第3輪的0.75×10－5，說明噬菌體得到了有效富集。DNA測序后發(fā)現(xiàn)，20個陽性噬菌體克隆中的15個克隆的插入序列均為QSFASLTNPRVL，將這些噬菌體克隆命名為ZW-15。免疫組化、Western blot均顯示ZW-

3、15噬菌體的該插入序列能與Sj童蟲表膜有效結合。體內(nèi)回輸試驗比較ZW-15及M13KE空載噬菌體的回收量，兩者從單位重量蟲體中的回收量差異顯著(P1＜0.01)，而兩者從單位重量肝臟中的回收量差別無統(tǒng)計學意義(P2＞0.05)，證實該ZW-15噬菌體的插入序列短肽能有效地靶向結合于體內(nèi)Sj童蟲表膜。
　　 結論：本研究篩選獲得陽性噬菌體克隆ZW-15所展示的短肽QSFASLTNPRVL能有效地靶向結合Sj童蟲表膜，將為進一步研究