東方田鼠血清補體殺傷日本血吸蟲童蟲效果和機制研究.pdf

1、血吸蟲病是一種分布廣泛、危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病，在我國日本血吸蟲病流行區(qū)釘螺分布面積仍較大，部分流行區(qū)仍存在一定數(shù)量的血吸蟲病傳染源，血吸蟲病流行與傳播的客觀因素以及疫情反復(fù)與回升的風(fēng)險因素依然存在。目前唯一大規(guī)模使用的治療藥物吡喹酮不能解決重復(fù)感染的問題，新藥和疫苗的研制仍是該病研究的重點。東方田鼠是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一一種具有天然抗日本血吸蟲病特性的哺乳動物，其抗病機制研究可為血吸蟲防控技術(shù)研究提供新方向。
　　本文應(yīng)用胸主

2、動脈灌注和組織培養(yǎng)法比較了東方田鼠和BALB/c鼠感染日本血吸蟲尾蚴后1d，3d，8d,12d和15d的感染部位皮膚、肺臟和肝臟等處的童蟲回收情況，結(jié)果兩種宿主感染尾蚴后不同時間點蟲體總回收率差異較大，東方田鼠為15.04％，7.05％，8.33％，0.48％，0.72％，均低于小鼠的39.24％，38.56％，46.17％，19.02％，43％。結(jié)果表明東方田鼠體內(nèi)日本血吸蟲童蟲消亡主要發(fā)生感染后的皮膚期和肝期。表觀病理觀察表明，東方

3、田鼠肝臟在感染后10d可見明顯的白色異物性包囊，感染后14d該類包囊依然存在，至感染后21d異物性包囊消失，小鼠則始終未見該類異物性包囊出現(xiàn)。組織病理觀察表明，東方田鼠感染后10-14d肝血管內(nèi)可見寄生蟲栓子，周圍炎細(xì)胞浸潤，形成嗜酸性膿腫，肝細(xì)胞多發(fā)灶性壞死，小鼠肝臟病變不明顯。血常規(guī)分析結(jié)果表明，東方田鼠在感染后1-16d白細(xì)胞顯著升高，白細(xì)胞5種分類結(jié)果顯示主要是中性粒細(xì)胞升高。血清生化分析顯示，血清白蛋白ALB、HDL-C在感染

4、后升高。東方田鼠血清補體活性CH50為512U/mL，應(yīng)用RT-PCR和ELISA檢測了東方田鼠和BALB/c鼠的補體相關(guān)分子C3，C9，CD59和DAF的表達(dá)水平，結(jié)果小鼠各指標(biāo)變化不明顯，東方田鼠感染后8dC3，C9和CD59轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，DAF感染后12d轉(zhuǎn)錄水平顯著升高。
　　體外殺蟲試驗結(jié)果顯示，東方田鼠正常血清和滅活補體血清孵育的日本血吸蟲童蟲死亡率分別為85.50％±7.15％和60.99％±8.61％，差異顯著

5、(p＜0.001)，掃描電鏡觀察到二者孵育的童蟲體表完整性存在差異，表明東方田鼠補體對日本血吸蟲童蟲具有顯著殺傷效果。利用C1qBP蛋白抑制東方田鼠C1q的血清孵育童蟲死亡率顯著低于正常血清(P＜0.001)，而用50℃熱滅活東方田鼠血清補體B因子孵育的童蟲死亡率沒有顯著變化，結(jié)果表明補體經(jīng)典途徑可能在東方田鼠對童蟲殺傷中發(fā)揮了重要作用。在體內(nèi)抑制試驗中，注射CVF和PBS對照組的東方田鼠在感染后8d的蟲體回收率分別為23.20％和8.

6、54％，15d為1.18％和0.42％，結(jié)果表明利用CVF抑制補體后童蟲回收率顯著提高。
　　篩選設(shè)計了3條東方田鼠C5基因特異的RNA干擾靶序列，構(gòu)建了相應(yīng)的重組RNA干擾慢病毒。LV2重組慢病毒在體外培養(yǎng)的東方田鼠腹腔巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)了C5基因轉(zhuǎn)錄下降25.76％，為進(jìn)行東方田鼠RNA干擾活體試驗提供了基礎(chǔ)。
　　綜上所述，東方田鼠體內(nèi)日本血吸蟲童蟲消亡主要發(fā)生感染后皮膚期和肝期，補體在抗感染中發(fā)揮了重要作用，經(jīng)典途徑是補