GRIM-19抑制人子宮頸癌移植瘤細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：
　　 宮頸癌在發(fā)展中國(guó)家依然是女性生殖道發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，子宮頸癌的重要致病因素是人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染，現(xiàn)已確定的HPV亞型達(dá)120余種，高危型HPV（high-risk HPV，HR-HPV）如HPV16、18等與CIN及子宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。子宮頸癌的治療方法是以手術(shù)治療和放射治療為主，以化療為輔，以基因治療為代表的生物治療目前已成為繼手術(shù)、化療、放療

2、之后針對(duì)惡性腫瘤的第四種治療模式。其中基因治療是將目的基因用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)導(dǎo)入靶細(xì)胞，使其表達(dá)此基因并獲得特定的功能，繼而執(zhí)行或介導(dǎo)對(duì)腫瘤的殺傷和抑制作用，從而達(dá)到治療目的。臨床已經(jīng)取得一定療效的藥物如 Trastuzumab。干擾素是治療病毒感染的常用藥物，但是其抗子宮頸癌的效果并不明顯，而干擾素/維甲酸聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因-19(gene associated with retinoid-interferon-induced

3、 mortality-19，GRIM-19)是一種新的細(xì)胞凋亡基因，通過多種機(jī)制來參與細(xì)胞凋亡。GRIM-19的正常表達(dá)可以維持細(xì)胞正常生活周期，使細(xì)胞從衰老進(jìn)入凋亡，低表達(dá)則使某些細(xì)胞不能正常地進(jìn)入細(xì)胞凋亡周期，從而引發(fā)腫瘤的發(fā)生。前期的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GRIM-19在子宮頸癌組織中表達(dá)顯著降低，體外將GRIM-19轉(zhuǎn)染到子宮頸癌細(xì)胞株中，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖顯著減慢，穩(wěn)轉(zhuǎn)GRIM-19的細(xì)胞接種裸鼠，其移植瘤的生長(zhǎng)也顯著受抑制，但是其具體機(jī)制

4、尚不清楚。
　　 目的：
　　 從細(xì)胞侵襲、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及血管生成四個(gè)方面闡明GRIM-19的表達(dá)抑制腫瘤生長(zhǎng)的具體機(jī)制。
　　 方法：
　　 將移植瘤剝離，提取組織檢測(cè)以下指標(biāo)：①免疫組化檢測(cè)組織切片中Ki-67、血管微密度的表達(dá)；② Western Blot檢測(cè)組織中GRIM-19、STAT3、p-STAT3、survivin、MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白的表達(dá)情況；③ RT-PCR檢測(cè)

5、組織中GRIM-19、STAT3、cyclin B1、Bcl-L2的表達(dá)情況；④通過Tunel實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 與HeLa/Con細(xì)胞的移植瘤相比較，HeLa/GRIM-19細(xì)胞的移植瘤具有以下特點(diǎn)：①免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ki-67的表達(dá)水平顯著降低，RT-PCR和Western Blot的結(jié)果提示促進(jìn)細(xì)胞增殖的STAT3及其下游基因的表達(dá)水平顯著降低，表明GRIM-19基因具有抑制細(xì)胞增殖的作用；

6、② Western Blot的結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-2、MMP-9的表達(dá)受到抑制，表明GRIM-19基因具有抑制細(xì)胞侵襲能力的作用；③微血管密度顯著降低，Western Blot的結(jié)果發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)受到抑制，表明GRIM-19基因具有抑制腫瘤血管生成的作用；④ Tunel的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凋亡的細(xì)胞顯著增加。
　　 結(jié)論：
　　 GRIM-19的表達(dá)，抑制了子宮頸癌細(xì)胞的增殖、血管的生成、細(xì)胞的侵襲，促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。提高GRI