PTD4透膜肽介導的VP3融合蛋白對宮頸癌抑瘤效應的探討.pdf

1、華中科技大學碩士學位論文PTD4透膜肽介導的VP3融合蛋白對宮頸癌抑瘤效應的探討姓名：王小婷申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：屈伸20080501華中科技大學同濟醫(yī)學院碩士學位論文（2008年）PTD4透膜肽介導的VP3融合蛋白對宮頸癌抑瘤效應的探討PTD4透膜肽介導的VP3融合蛋白對宮頸癌抑瘤效應的探討中文摘要中文摘要雞貧血病毒（chickenanemiavirus，CAV）是一種類型獨特的環(huán)狀單鏈（負鏈）DNA病

2、毒。研究證實VP3蛋白(Apoptin亦稱凋亡素)是CAV的功能蛋白，可廣泛誘導腫瘤細胞凋亡，而且僅誘導具有致瘤表型細胞或轉(zhuǎn)化表型細胞的凋亡，而對正常二倍體細胞無凋亡效應、無細胞毒性。并且，VP3誘導凋亡途徑為P53非依賴型，不受Bcl2高表達的抑制。傳統(tǒng)化療藥物常常由于P53突變導致腫瘤細胞對化療藥物敏感性降低，因此，VP3蛋白是一種更具應用前景的抗腫瘤生物制劑。細胞透膜肽（CellPeratingPeptide，CPP）是一類能攜帶

3、生物大分子進入細胞的短肽，它不依賴經(jīng)典的細胞內(nèi)吞。大量的研究表明細胞透膜肽具有強大的運載潛能，不僅可以攜帶多肽、GFP、RNaseA而且可以攜帶DNA、反義核酸、有機分子、脂質(zhì)體等。與其他的蛋白質(zhì)形成的融合蛋白也能透過細胞膜，并發(fā)揮這些蛋白質(zhì)的生物學功能。因此，本研究正是將兩者結(jié)合在一起，為腫瘤等疾病的治療提供新思路。本課題組在前期研究中已證明PTD4能通過生物合成而實現(xiàn)其融合蛋白PTD4GFPVP3對體外培養(yǎng)的多種細胞的透膜作用。本研

4、究分別從體內(nèi)外實驗觀察PTD4VP3融合蛋白誘導宮頸癌細胞凋亡的效應。利用PTD4VP3融合蛋白的原核表達載體，經(jīng)IPTG誘導融合蛋白表達，鎳金屬鰲合層析柱純化獲得融合蛋白。利用流式細胞儀檢測融合蛋白體外誘導人宮頸癌Hela細胞的凋亡效率。在此基礎上建立人宮頸癌Hela細胞異種移植裸鼠模型，將融合蛋白PTD4VP3，涂抹在宮頸癌皮下移植瘤的皮膚表面治療7天后，比較皮下移植瘤大小并利用TUNEL法觀察PTD4VP3融合蛋白誘導宮頸癌細胞的