藻酸雙酯鈉對(duì)2型糖尿病致動(dòng)脈粥樣硬化的影響.pdf

1、隨著世界人口的老齡化及人們生活方式的改變，2型糖尿病的患病率日益增高，而心血管系統(tǒng)疾病又是2型糖尿病致死的主要原因，占80％左右，其中以動(dòng)脈粥樣硬化最為常見。2型糖尿病的代謝紊亂綜合癥，如：高血糖、高血脂、高胰島素血癥、纖溶系統(tǒng)功能障礙等均是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素。藻酸雙酯鈉(Polysaccharidesulfate，PSS)是一種天然海洋藥物，是酸性粘多糖聚陽(yáng)離子化合物，具有肝素樣生理作用，臨床上多用于抗凝血的治療

2、，但目前尚未見該藥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化治療作用相關(guān)機(jī)制的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)選用與人2型糖尿病發(fā)病過(guò)程和病理特征很相似的大鼠模型，觀察對(duì)其并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的影響及核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)的活化和細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)表達(dá)的變化，觀察組織纖溶酶原激活物(t-PA)和組織纖溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)之間活性的變化，利用藻酸雙酯鈉的干預(yù)作用，探討其對(duì)2型糖尿病致動(dòng)脈粥樣硬化的作用和可能存在的機(jī)制。 材料與方法1.

3、材料鏈脲佐菌素(SigmaCo.，USA)；藻酸雙酯鈉(青島海爾第三制藥廠)；血糖儀及試紙(LIFESCAN，USA)；二甲雙胍(廣州白云山制藥廠)；洛伐他汀(黑龍江肇東華富有限公司)；免疫組化試劑盒(武漢博士德公司)；Westernblotting試劑(SantaCruzeCo.，USA)；組織纖溶酶原激活物和組織纖溶酶原激活抑制物活性測(cè)定試劑盒(上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司)。 雄性Wister大鼠，體重150g左右，由中國(guó)醫(yī)科

4、大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。 2.方法選用雄性Wister大鼠70只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，測(cè)血糖并隨機(jī)取其中10只給予普通飲食飼養(yǎng)，作為正常對(duì)照組；其余的60只給予高糖高脂飼料(2％膽固醇、1％膽酸鈉、20％煉豬油、10％蔗糖及67％的普通飼料配制而成)，喂養(yǎng)8周后，尾靜脈注射0.3％的鏈脲佐菌素(STZ，檸檬酸鈉緩沖液溶解，PH7.2)，0.1ml/Kg，3周后檢測(cè)血糖，以空腹血糖值(FBG)≥10.0mmol/L者視為造模成功，篩選

5、符合條件的大鼠并隨機(jī)平均分為4組：模型(Mod)組、藻酸雙酯鈉(PSS)組、二甲雙胍(Met)組、洛伐他汀(Lov)組；正常組和模型組給予0.9％Nacl溶液灌胃；PSS組給予1.8％的PSS灌胃；二甲雙胍組給予2％Metformin灌胃；洛伐他汀組給予0.04％Lovastatin灌胃；劑量均為0.1ml/Kg，給藥8周，治療期間，各組均普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。 實(shí)驗(yàn)開始及第9周、12周、20周用血糖儀尾靜脈取血檢測(cè)血糖；20

6、周末，經(jīng)球后靜脈叢取血作血清學(xué)檢查：全自動(dòng)生化分析儀(Hitachi，7600-020)酶法測(cè)血清總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；發(fā)色底物法檢測(cè)血清中組織纖溶酶原激活物和組織纖溶酶原激活抑制物的活性；最后，大鼠用0.4％戊巴比妥(0.1ml/Kg)腹腔注射麻醉后，左胸切口，經(jīng)左心室用0.85％Nacl灌洗，至損傷的右心耳流出液清亮為止，立即取胸主動(dòng)脈，剪取同一部位1

7、.0cm長(zhǎng)血管固定于4％多聚甲醛溶液中過(guò)夜，石蠟包埋，橫斷面連續(xù)4μm切片，分別用作蘇木素-伊紅染色和免疫組化染色；其余主動(dòng)脈則保存于液氮中，用于Westernblotting；另各組取同一部位腹主動(dòng)脈1.0cm，置于3％戊二醛固定液中，作透射電鏡標(biāo)本，常規(guī)處理后，在日產(chǎn)H-600型透射電鏡下放大8000倍觀察，攝片。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.PSS組的空腹血糖(FBG)、血脂(TG、TC、LDL-C)水平顯著低于模型組(P＜0.05)，而

8、PSS組的血脂(TG、TC、LDL-C)水平與Lov組無(wú)明顯差別、空腹血糖(FBG)水平與Met組無(wú)明顯差別； 2.PSS組PAI-1的活性明顯低于模型組，而t-PA的活性則明顯高于模型組(P＜0.05)； 3.PSS組粥樣瘢塊內(nèi)NF-κB和ICAM-1的表達(dá)比模型組明顯減少(P＜0.05)； 4.PSS組主動(dòng)脈損傷明顯輕于模型組。討論目前糖尿病已經(jīng)是一種繼腫瘤和心血管之后的危及公眾健康的第三大疾病，其中2型糖尿

9、病占85％以上，在發(fā)展中國(guó)家比例更高。心血管疾病是2型糖尿病致死的主要原因，且動(dòng)脈粥樣硬化是最常見的心血管并發(fā)癥。動(dòng)脈粥樣硬化是一種免疫炎性疾病，內(nèi)皮受損和功能紊亂是動(dòng)脈粥樣硬化形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)，從而引發(fā)了一系列病理生理反應(yīng)。2型糖尿病所伴隨的代謝紊亂綜合癥，如：高血糖、高血脂、高胰島素血癥、纖溶系統(tǒng)功能障礙等均是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素。 核因子NF-κB是一種廣泛存在于細(xì)胞中的多顯性轉(zhuǎn)錄因子，具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作

10、用，它與多種基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)系，尤其是與免疫炎癥相關(guān)基因如：各種粘附分子、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和免疫受體等的轉(zhuǎn)錄調(diào)控密切相關(guān)。2型糖尿病伴隨的高血糖、高血脂、高胰島素血癥使機(jī)體氧化能力增強(qiáng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，同時(shí)上述因素又激活了核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，活化的核因子NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)與之有關(guān)的粘附分子ICAM-1、VCAM-1、MCP-1等的表達(dá)，它們促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞向血管壁粘附和浸潤(rùn)。 同時(shí)糖尿病患者纖溶系統(tǒng)功能紊亂，t-P

11、A活性下降，而PAI-1活性增強(qiáng)，使機(jī)體處于高凝狀態(tài)，促進(jìn)白細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板向受損內(nèi)皮處游移并粘附于此，導(dǎo)致粥樣瘢塊的擴(kuò)大；同時(shí)t-PA和PAI-1活性的改變，也能活化核因子NF-κB，促進(jìn)相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)一步加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。 藻酸雙酯鈉，是一種天然海洋類藥物，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了，藻酸雙酯鈉不僅有降低血糖的作用，還能降低血脂，改善纖溶系統(tǒng)的功能，明顯的減輕了2型糖尿病并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展，將其開發(fā)