牛免疫球蛋白G輕鏈、重鏈分離純化及其抗血清的制備.pdf

1、免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)即是抗體，1964年國際衛(wèi)生組織把具有抗體活性或化學結構上與抗體相似的球蛋白統(tǒng)一命名為免疫球蛋白。在機體內Ig主要以分泌型和膜型兩種形式存在，前者主要存在于血液、組織液及外分泌液中發(fā)揮各種免疫功能；后者存在于B細胞表面，是B細胞表面標志之一。Ig是機體免疫應答中產生的重要效應分子，其所介導的體液免疫在機體抵抗外來病源中發(fā)揮了極其重要的作用。早在用X射線晶體衍射技術來揭示Ig結構之前，人們就

2、已經對其結構進行了大量的研究與假設，并與結晶學實驗所得結論一致?，F(xiàn)在已能確定其基本結構模型：Ig是由兩條完全相同的重鏈和兩條完全相同的輕鏈以多肽鏈間的二硫鍵固定而成的球蛋白，其重鏈與輕鏈各有其自己的可變區(qū)與恒定區(qū)。作為抗體，其可變區(qū)的多態(tài)性決定了其識別抗原的多態(tài)性。作為一種大分子糖蛋白，Ig還是一種強的免疫原，并可根據其重鏈恒定區(qū)的免疫原性差異將其分為多種血清型。每個血清型Ig所行使的功能也各不相同，通過對機體各種血清型Ig的精確測定可

3、以對機體所處的免疫狀態(tài)進行評估。本研究所獲得的牛免疫球蛋白G(IgG)、輕鏈(IgG-L)和重鏈(IgG-H)的抗血清可以在牛IgG定量及定性檢測中得到廣范應用，這比應用傳統(tǒng)檢測方法準確得多，對于科學研究和實踐應用都有很大的意義。 本實驗是應用鹽析技術和離子交換層析技術直接從富含Ig的牛初乳中分離純化IgG，對傳統(tǒng)方法進行了優(yōu)化，可以快速大量獲得高純度的IgG，經過檢測其純度完全適用于免疫動物和下步工作。在此基礎上我們應用化學方

4、法裂解IgG分子內肽鏈間的二硫鍵，并保留IgG單條肽鏈分子內的二硫鍵以保持其高級結構來維系其天然免疫原性，加入烷基化試劑對新生成的巰基進行烷基化防止其再度聚合，以此獲得了大量的IgG-L、IgG-H的混溶液。應用分子篩層析技術可以將輕、重鏈很好的分離開來，分離效果非常理想，獲得了純化的IgG-L和IgG-H肽鏈，并通過SDS-PAGE測得其分子量分別為27.66kD和55.67KD。二者經濃縮后免疫家兔，獲得兔抗牛IgG-L、IgG-H