鵝免疫球蛋白λ型輕鏈基因克隆及其恒定區(qū)特異性抗體的制備與應(yīng)用研究.pdf

1、免疫球蛋白(Ig)是體液免疫的重要效應(yīng)分子，在機(jī)體免疫和調(diào)節(jié)中具有重要的作用，有關(guān)鵝Ig分子水平方面的研究國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道。
　　 本研究首先根據(jù)GenBank中雞Ig輕鏈(ChIgL)和鴨Ig輕鏈(DuIgL)的cDNA序列設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR和巢氏PCR相結(jié)合的方法首次克隆得到了鵝Ig輕鏈(GoIgL)的cDNA序列，然后對(duì)克隆得到的序列進(jìn)行了序列比對(duì)分析、氨基酸相似性分析、信號(hào)肽預(yù)測(cè)、糖基化分析、3D結(jié)構(gòu)分析和C區(qū)進(jìn)

2、化分析，得出克隆得到的cDNA序列為GoIgL，且屬于λ型。
　　 其次根據(jù)克隆得到的GoIgL序列設(shè)計(jì)特異性表達(dá)引物，采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)得到了GoIgL恒定區(qū)(GoIgCL)的重組蛋白rGoCL，并以此為免疫原制備了抗GoIgCL多抗，分析了抗GoIgCL多抗與禽類IgL之間的抗原抗體反應(yīng)，進(jìn)一步證實(shí)了禽類IgCL上存在有共同的B細(xì)胞抗原表位。
　　 最后本研究以Protein A親和層析純化的鵝血清Ig免疫BALB

3、/c小鼠，獲得2株分泌抗GoIgCL單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1811和3G9，然后對(duì)這兩株雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行了生物學(xué)鑒定。間接免疫熒光、Western blot和間接ELISA試驗(yàn)結(jié)果均表明這兩株雜交瘤細(xì)胞分泌抗GoIgCL抗體，不與其它物種Ig發(fā)生反應(yīng)，特異性良好。以制備的抗GoIgCL單抗為配體制備的單抗親和層析柱能純化出鵝血清中的Ig：用HRP標(biāo)記后的抗GoIgCL單抗可以檢測(cè)免疫BSA和GPV病毒樣粒子后鵝機(jī)體內(nèi)特異性