菜籽多糖RSPS1-3的分離純化及一級(jí)結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、近年來，由于對(duì)膜的化學(xué)功能、免疫物質(zhì)及新藥物資源等研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)多糖在生物體內(nèi)不僅作為能量資源或結(jié)構(gòu)材料，更重要的是還參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)，具有多種多樣的生物學(xué)功能。多糖的生物學(xué)功能與其一級(jí)結(jié)構(gòu)及高級(jí)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。該文以資源豐富的雙低油菜籽餅粕為研究對(duì)象，利用生物大分子研究的最新技術(shù)和現(xiàn)代分離分析手段，對(duì)菜籽多糖進(jìn)行分離純化、理化性質(zhì)及一級(jí)結(jié)構(gòu)的研究。主要研究結(jié)果如下： 1.在保證菜籽多酚、菜籽蛋白和菜籽植酸得率

2、的同時(shí)，采用水提醇沉法提取分離菜籽多糖。經(jīng)正交試驗(yàn)得到菜籽粗多糖RSPS的最優(yōu)化提取工藝條件為：100℃條件下以1：25的料液比浸提菜籽餅粕4小時(shí)，此時(shí)，RSPS的得率為2.8％。 2.通過離子交換和葡聚糖凝膠二級(jí)柱層析純化方法獲得菜籽多糖相對(duì)均一的組分RSPS1-3。葡聚糖凝膠柱層析和聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)表明RSPS1-3是分子量分布較為均一的糖蛋白綴合物。經(jīng)測(cè)定RSPS1-3中中性糖含量為51.4％、葡萄糖醛酸含量為39.

3、2％、蛋白質(zhì)含量為4.45％。凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定RSPS1-3的平均分子量為2.24×105Dal。 3.經(jīng)紫外光譜、紅外光譜掃描也驗(yàn)證了RSPS1-3是含有蛋白的多糖。薄層色譜和氣相色譜的結(jié)果顯示，菜籽多糖RSPS1-3主要由鼠李糖、甘露糖、果糖、半乳糖和葡萄糖組成，其中還含有一種未知糖，六種單糖的摩爾比依次為鼠李糖：未知糖：甘露糖：果糖：半乳糖：葡萄糖=1.0：2.05：2.32：1.34：4.95：2.91。本研究

4、運(yùn)用兩種不同的衍生方法對(duì)菜籽多糖RSPS1-3進(jìn)行氣相前的衍生化處理，結(jié)果表明各標(biāo)準(zhǔn)單糖經(jīng)乙?；螽a(chǎn)生了3～4個(gè)異構(gòu)峰，保留時(shí)間相差無幾，而經(jīng)三甲基硅烷法衍生后，未見任何異構(gòu)峰，且保留時(shí)間差異明顯，這與文獻(xiàn)資料記載的乙?；苌ú灰桩a(chǎn)生異構(gòu)峰的說法相反。 4.氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)得菜籽多糖RSPS1-3中的蛋白主要由谷氨酸、賴氨酸、甘氨酸等15種氨基酸組成；β-消除反應(yīng)表明，RSPS1-3的糖鏈與蛋白質(zhì)之間通過O-糖苷鍵相連。高碘

5、酸氧化反應(yīng)的結(jié)果證實(shí)RSPS1-3的糖鏈中存在較多的1→6糖苷鍵，而其他糖殘基則以1→3糖苷鍵相連，或以1→2，1→4糖苷鍵相連。 5.紅外圖譜解析得知，菜籽多糖RSPS1-3的糖鏈主要由α-糖苷鍵連接的吡喃糖組成，而剛果紅試驗(yàn)表明，RSPS1-3亦能與剛果紅絡(luò)合發(fā)生顯色反應(yīng)，這與文獻(xiàn)記載的只有含β-螺旋構(gòu)型的多糖才能發(fā)生剛果紅顯色反應(yīng)似乎矛盾，RSPS1-3是否具有螺旋結(jié)構(gòu)還有待進(jìn)一步證實(shí)。 該論文的創(chuàng)新點(diǎn)在于保證菜籽