苯醚甲環(huán)唑誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞毒性及其與CYP3A4相互作用機(jī)制研究.pdf

1、苯醚甲環(huán)唑作為三唑類(lèi)殺菌劑中的一種被廣泛運(yùn)用于各種農(nóng)作物的殺菌防治。在多種環(huán)境介質(zhì)與生物體內(nèi)殘留，其潛在的生物毒性引起了國(guó)內(nèi)外環(huán)境學(xué)與毒理學(xué)研究者的高度關(guān)注。本文選取苯醚甲環(huán)唑(Difenoconazole)作為研究對(duì)象，研究了其對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的毒性機(jī)制及其對(duì)CYP3A4酶活性的抑制作用。主要獲取的結(jié)果與結(jié)論如下:
　　(1)文中采用MTT、western blot、流式細(xì)胞術(shù)、熒光共聚焦等實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其產(chǎn)生的細(xì)胞毒性進(jìn)行研

2、究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)苯醚甲環(huán)唑能夠誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2存活率的降低，并隨著濃度的上升存活率明顯下降;在細(xì)胞核形態(tài)上亦發(fā)生明顯的裂解;能顯著調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-8、9及PARP的表達(dá)，并呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)及時(shí)間效應(yīng);其誘導(dǎo)活性氧ROS的產(chǎn)生，且同時(shí)產(chǎn)生于線(xiàn)粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng);在凋亡早期，線(xiàn)粒體膜電位隨著濃度的上升明顯下降，細(xì)胞色素C(Cyto.c)從線(xiàn)粒體釋放到胞漿中;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白也呈現(xiàn)一定的趨勢(shì)，說(shuō)明苯醚甲環(huán)唑誘導(dǎo)HepG2發(fā)

3、生凋亡有通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑;苯醚甲環(huán)唑誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡是ROS介導(dǎo)的線(xiàn)粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑共同作用的。
　　(2)本文采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR發(fā)現(xiàn)苯醚甲環(huán)唑直接作用于細(xì)胞對(duì)CYP3A4基因并沒(méi)有明顯的調(diào)控作用;western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CYP3A4蛋白的表達(dá)也沒(méi)有明顯的改變;最后采用純蛋白研究苯醚甲環(huán)唑?qū)τ贑YP3A4酶的活性的影響，結(jié)果顯示苯醚甲環(huán)唑能夠強(qiáng)烈地抑制CYP3A4酶的活性。
　　本研究發(fā)現(xiàn)了苯