多發(fā)性骨髓瘤中C-MYC、HIF-1α及VEGF表達異常的研究.pdf

1、第一章C-MYC、HIF-1α以及VEGF在MM患者體內的表達及意義
　　目的：探討初發(fā)、化療后緩解、復發(fā)MM患者體內C-MYC、HIF-1α、VEGF的表達情況及相關性，為臨床診斷、治療及判斷療效提供新思路。
　　方法：分別收集10例初發(fā)MM患者、10例治療緩解MM患者、10例復發(fā)MM患者以及10例正常人外周血，提取單個核細胞，用RT-PCR檢測不同組細胞中C-MYC以及HIF-1α的表達（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進行

2、計算），并對二者的相關性進行統(tǒng)計學分析；用Western-Blot檢測不同組細胞中C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達,（以目的基因與內參照β-actin表達量的比值作為最終結果）。
　　結果：C-MYC及HIF-1α在多發(fā)性骨髓瘤患者中的表達與正常人相比增高，且在初發(fā)組及復發(fā)組中的表達高于治療緩解組，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05，而初發(fā)組與復發(fā)組統(tǒng)計學分析無明顯差別；C-MYC與HIF-1α具有相關性，相關系數(shù)r=0.87

3、7；C-MYC、HIF-1α及VEGF蛋白在多發(fā)性骨髓瘤患者體內表達增高，且三種蛋白在初發(fā)組及復發(fā)組中的表達高于治療緩解組，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05。
　　結論：與正常人相比，多發(fā)性骨髓瘤患者體內的C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達異常升高，在治療緩解MM患者中的表達低于初發(fā)MM患者及復發(fā)MM患者，且C-MYC與HIF-1α二者之間具有相關性。提示C-MYC與HIF-1α與MM的發(fā)生、發(fā)展有密切關系，需擴大樣本量進一步

4、研究。
　　第二章U266細胞株中C-MYC及HIF-1α關系的研究
　　目的：探討多發(fā)性骨髓瘤細胞株U266中C-MYC與HIF-1α的關系，以及C-MYC/HIF-1α對VEGF的影響，為臨床治療MM尋找新靶點。
　　方法：用細胞轉染技術分別將沉默C-MYC基因的熒光質粒、沉默HIF-1α基因的熒光質粒以及空白熒光質粒分別轉染進入U266細胞株中，先用共聚焦顯微鏡檢測細胞轉染效率，其次用RT-PCR技術檢測不同組細

5、胞中C-MYC與HIF-1α的表達（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進行計算）；Western-Blot技術檢測不同組細胞中C-MYC、HIF-1α及VEGF蛋白的表達，（以目的基因與內參照β-actin表達量的比值作為最終結果）。
　　結果：與空白對照組相比，沉默C-MYC基因后C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達均降低，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05，沉默HIF-1α基因后HIF-1α及VEGF的表達均降低，差異有統(tǒng)計學意義，

6、P<0.05，C-MYC基因的表達無明顯下降。
　　結論：HIF-1α的表達依賴于C-MYC基因的調控，且VEGF的合成和分泌依賴于C-MYC/HIF-1α的調節(jié)，C-MYC/HIF-1α可能成為一個治療MM的新靶點。
　　第三章甲磺酸氟馬替尼對U266細胞株中C-MYC、HIF-1α及VEGF的影響
　　目的：本研究旨在探討新一代酪氨酸激酶抑制劑甲磺酸氟馬替尼對發(fā)性骨髓瘤細胞株U266中C-MYC、HIF-1α及VE

7、GF作用。
　　方法：采用RT-PCR檢測甲磺酸氟馬替尼(0、1、5、10 umol/L)作用于U266細胞株8h、16h、24h后C-MYC及HIF-1α的表達情況（讀取CT值，利用2-ΔΔCT進行計算）；采用Western-blot進一步從蛋白水平檢測甲磺酸氟馬替尼(0、1、5、10 umol/L)作用于人多發(fā)性骨髓瘤U266細胞株16h后C-MYC、HIF-1α及VEGF的表達情況（目的基因與內參照β-actin表達量的比值

8、作為最終結果）
　　結果：C-MYC基因及HIF-1α基因隨著藥物氟馬替尼作用濃度增大，其表達逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；在相同濃度的氟馬替尼作用下，隨著藥物作用時間的延長其表達逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；C-MYC蛋白、HIF-1α蛋白及VEGF蛋白在甲磺酸氟馬替尼作用相同時間時，隨著藥物作用濃度的增大，三者表達均逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）
　　結論：甲磺酸氟馬替尼