注射用腦脈清的研究.pdf

1、注射用腦脈清是由丹參、三七和冰片組成的復方制劑,主要治療急性腦梗塞及后遺癥。本方來源于中華人民共和國藥典2005年版一部“復方丹參片”,以復方丹參片為理論基礎,對其進行二次開發(fā),借助大孔樹脂精制純化工藝,制備了丹參中間體。結合凍干技術,研究凍干成型工藝、冰片在凍干過程的穩(wěn)定性、粉針劑的質量標準及安全性,成功地研制了注射用腦脈清,符合中藥注射劑研究的技術要求,使制劑的安全性、有效性和穩(wěn)定性得到保證。通過血藥濃度法對成品制劑中七種成分在大鼠

2、體內進行藥物動力學研究,并與單方制劑進行對比,進行了較全面的初步的探索性研究,為臨床應用奠定了基礎。
　　 本文首先采用TLC法對丹參水溶性成分(丹酚酸B、迷迭香酸、丹參素、原兒茶醛)、三七主要皂苷成分(三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1)及冰片為指標性成分,進行定性分析。采用HPLC法對丹參主要水溶性成分(丹酚酸B、迷迭香酸)及三七中皂苷成分(三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd)為指標性成分進行定量分析。采用G

3、C法對冰片進行定量分析及對丹參中間體、三七總皂苷進行有機溶劑殘留限量檢查。所建立的分析方法能夠準確的對制劑中的主要有效成分進行定性和定量分析。
　　 采用大孔樹脂精制純化技術,對丹參提取物進行精制純化。以丹酚酸B為指標性成分,采用單因素考察,確定最終工藝為:將丹參提取物溶液用鹽酸調至pH為2,以丹酚酸B計4.06mg·mL-1)按丹酚酸B/大孔樹脂的比例為26mg·g-1以1mL·min-1的上柱速度上柱,吸附30～40min后

4、,分別用pH為2的酸水5BV及20％的pH為2的酸性乙醇4BV洗脫大部分雜質,然后用40％的乙醇5BV洗脫,并對其進行濃縮及凍干,精制得到丹參中間體。所制得的三批丹參中間體,丹酚酸B的轉移率都在80％以上,其中丹酚酸B的含量都達到60％以上,表明工藝的重現(xiàn)性較好,為下一步成品制劑的研究奠定基礎,有利于保證制劑的穩(wěn)定可控。
　　 通過對冰片所用增溶劑種類和用量的考察及支撐劑、活性炭、pH的考察,以凍干后樣品的外觀及冰片的含量為指標

5、,進行處方篩選。確定最終處方為(各成分按每瓶計):丹參中間體45mg、三七總皂苷15mg、冰片6mg、羥丙基-β-環(huán)糊精108mg、抗壞血酸2.5mg、甘露醇200mg。測得樣品的低共熔點為-2.6℃,凍干工藝為:預凍溫度:超低溫冰箱(-70℃)預凍3h,-35℃,0.5 h；第1次干燥溫度:-10℃,12 h；第2次升華溫度:20℃,2 h。按以上處方及工藝制備5批樣品,并按照所建立的分析方法進行質量研究。結果每瓶含丹酚酸B、迷迭香酸

6、分別大于27.0mg、1.7 mg,所測成分占丹參中間體的64％以上；三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1及Rd分別大于1.2mg、5.1mg、0.6mg、4.3mg、1.0mg,所測成分占三七總皂苷的80％以上:冰片大于5.8mg。同時對成品制劑的安全性(刺激性、溶血性、過敏性)及急性毒性進行研究。結果表明,在擬定工藝條件下,所制得的成品制劑有效成分含量穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,對豚鼠不產生全身過敏性,兔紅細胞無明顯體外溶血性；對家兔耳緣

7、靜脈無明顯刺激性；對家兔肌肉注射給藥無明顯局部刺激性。
　　 應用血藥濃度法對丹參中間體單方、三七總皂苷單方和注射用腦脈清復方制劑進行大鼠體內的藥動學研究,采用UPLC-MS測定血藥濃度,血藥濃度數(shù)據(jù)采用DAS2.0非隔室模型統(tǒng)計矩計算。單方(丹參中間體、三七總皂苷)中的丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1及Rd的AUC(0-∞)及t1/2分別為5240±3212、381.1±138.2、2557±86

8、3、5108±1291、461.5±141.3、362583±94805、69725±11614μg·h·L-1、2.57±1.44、0.59±0.08、0.68±0.33、0.49±0.17、0.38±0.10、15.15±3.18、16.73±4.97 h；復方(注射用腦脈清)中相應成分的AUC(0-∞)及t1/2分別為5732±2622、551.9±186.2、2550±2402、5116±4369、591.6±549.6、275