冬凌草甲素誘導MDA-MB-231細胞凋亡機制及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移相關酶的實驗研究.pdf

1、南昌大學醫(yī)學院碩士學位論文冬凌草甲素誘導MDAMB231細胞凋亡機制及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移相關酶的實驗研究姓名：江永青申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：熊向陽20080601摘要這種作用呈一定的劑量和時間依賴性。5、10、20、409mol／L冬凌草甲素處理MDA—MB231細胞24h，細胞抑制率分別為(102233176)％、(1279942335)％、，(44924558)和(5665442315)％；處理48h，細胞抑

2、制率分別為(116624253)％、(1636741032)％、(52762士3390)％和(6090843211)％；處理72h，細胞抑制率分別為(2209245960)％(7799241524)％、(9171640458)％和(9517640780)％。冬凌草甲素處理24h、48h和72h的IC50分別為3062，2545和7210gmol／L。2觀察到細胞形態(tài)和特有的生化特征。形態(tài)學觀察可見部分細胞自瓶壁脫離、崩解死亡，懸浮與培養(yǎng)

3、液中，部分胞體變細變小，部分細胞邊界不清，胞漿內(nèi)顆粒粗大，少數(shù)的細胞仍貼壁生長，殘存細胞形態(tài)不規(guī)則，狀態(tài)差，反光差；空白對照組細胞貼壁緊，形態(tài)規(guī)則狀態(tài)良好，反光強。生化方面，DNA瓊脂糖凝膠電泳可見DNA梯狀條帶，而正常對照組沒有出現(xiàn)上述特征。3半定量RTPCR檢測結(jié)果顯示，bclxlmRNA表達下調(diào)，而bid和caspase3mRNA表達上調(diào)。5，1O，20和401amol／L冬凌草甲素處理組bclxl／GAPDH光密度積分值之比分別

4、為03470016，026740019，013740045和007340020，與正常對照組03700026相比有顯著差異；bid／GAPDH光密度積分值之比分別為02370044，0397400250650士0050和087040030與正常對照組01830021相比有顯著差異；caspase一3／GAPDH光密度積分值之比分別為01230059，02230015，028340021和03570025與正常對照組007340015相比

5、有顯著差異。4流式細胞儀檢測，48h凋亡率為75％。5半定量RTPCR檢測結(jié)果顯示，npamRNA表達下調(diào)，HpaJGAPDH光密度積分值之比分別為0616a：0032，056540019，043440021和034840028與正常對照組065440033相比有差異。6明膠酶譜法檢測結(jié)果顯示，MMP一2，MMP9的活性降低。5，10，20和409mol／L冬凌草甲素處理組與對照組MMP一2光密度積分值之比分別為092040020，07