基于AurorA-A抑制調(diào)控人乳腺癌MDA-MB-231細胞體外增殖與血管新生的實驗研究.pdf

1、目的:
　　驗證抑制Aurora-A表達后能否抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞體外增殖與促血管新生的能力，并初步探討相關(guān)作用機制。
　　方法:
　　以人乳腺癌MDA-MB-231細胞作為實驗對象，將特異siRNA轉(zhuǎn)染入細胞來抑制Aurora-A的表達。以轉(zhuǎn)染對照siRNA的細胞為對照組，用WesternBlot法驗證低表達Aurora-A的實驗組建立是否成功。以正常MDA-MB-231細胞作為對照組，應(yīng)用CCK-8

2、法檢測細胞增殖抑制率，Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲能力，人臍靜脈內(nèi)皮細胞小管生成實驗檢測促血管管腔形成能力，Elisa法檢測分泌至細胞外的VEGF蛋白水平，q-PCR檢測細胞內(nèi)VEGFmRNA表達水平。結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，以SPSS20軟件進行統(tǒng)計分析，采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05時認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、使用特異的siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細胞，WB的灰度分析結(jié)果顯示，相

3、較于正常MDA-MB-231細胞組，轉(zhuǎn)染特異Aurora-A siRNA的細胞中Aurora-A及p-Aurora-A的蛋白表達水平分別被下調(diào)32％、72％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p值均＜0.05）。
　　2、以正常MDA-MB-231細胞為對照組，沉默Aurora-A后24h對MDA-MB-231細胞的增殖抑制率為17.9±2.7％。Transwell實驗顯示沉默Aurora-A后突破基質(zhì)膠進入Transwell下室的細胞數(shù)量為85

4、.8±10.6，明顯少于對照組的細胞數(shù)量119.2±10.9，減少28.0±14.1％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細胞體外增殖、侵襲的能力減弱。
　　3、以正常MDA-MB-231細胞為對照組，HUVEC小管生成實驗顯示沉默Aurora-A后形成的管腔形態(tài)不完整，HUVEC細胞排列不規(guī)則。管腔數(shù)目計數(shù)結(jié)果顯示沉默Aurora-A后形成的管腔數(shù)目為6.4±1.3，明顯少于對照組

5、的15.2±1.3，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細胞的促血管生成能力減弱。
　　4、用q-PCR檢測兩組細胞VEGF的mRNA表達發(fā)現(xiàn)，沉默Aurora-A后，VEGF mRNA的表達量明顯下降，為對照組的14.3±0.9％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。用Elisa法檢測兩組細胞分泌至胞外VEGF的蛋白量，結(jié)果顯示對照組細胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為911.1±7.

6、0pg/ml，沉默Aurora-A組細胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為555.9±18.4 pg/ml，下降至對照組的61.0％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。表明沉默Aurora-A后MDA-MB-231細胞的VEGF轉(zhuǎn)錄及蛋白分泌均受到明顯抑制。
　　結(jié)論:
　　1、成功利用Aurora-A siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，使Aurora-A蛋白表達量下降。
　　2、抑制Aurora-A的表達后，能有效