人參皂苷Rb1抗AngⅡ致心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)及機(jī)制探討.pdf

1、目的：研究人參皂苷Rb1對(duì)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞肥大的藥物效應(yīng)及其作用機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細(xì)胞3天后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照藥精氨酸(L-arg1×10-3mol·L-1)組、Rb1高劑量(200μg·ml-1)組、Rb1中劑量(100μg·ml-1)組和Rb1低劑量(50μg·ml-1)組，為了觀察Rb1抗心肌肥大作用是否與NO釋放有關(guān)，我們?cè)诹硪粋€(gè)Rb

2、1高劑量加入NO合酶抑制劑L-NAME,即Rb1高劑量(200μg·ml-1)+L-NAME(1×10-3mol·L-1)組。除正常對(duì)照組外，其余各組均加入1×10-7mol·L-1的AngⅡ誘導(dǎo)心肌肥大，并同時(shí)根據(jù)組別不同加入相應(yīng)劑量的受試藥，繼續(xù)培養(yǎng)2天，用于相應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)：以HE染色觀察細(xì)胞肥大情況并用BI2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)量細(xì)胞直徑、用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白含量、采用RT-PCR方法觀察ANFmRNA的表達(dá)

3、等作為心肌肥大指標(biāo)；然后利用Ca2+熒光指示劑Fura-2/AM負(fù)載心肌細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度([Ca2+]i)變化、采用RT-PCR方法觀察CaNmRNA的表達(dá)以探討人參皂苷Rb1抑制心肌肥大的可能機(jī)制。 結(jié)果：1×10-7mol·L-1AngⅡ具有明顯的誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的作用：模型組細(xì)胞直徑和蛋白含量明顯增大(P＜0.001)；HE染色可見(jiàn)心肌細(xì)胞腫脹，體積增大、ANFmRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.001)；細(xì)胞[C

4、a2+]i明顯升高(P＜0.001)；CaNmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。Rb150、100和200μg·ml-1呈劑量依賴性地抑制AngⅡ10-7mol·L-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)使AngⅡ所增大的心肌細(xì)胞直徑分別縮短20.5％、40.3％和47.5％，并使AngⅡ增強(qiáng)的ANFmRNA表達(dá)呈明顯的濃度依賴性下降(P＜0.001)。與此同時(shí)，上述三種濃度的Rb1還使AngⅡ所升高的心肌細(xì)胞[Ca2+]i分別抑制30.8％、38.6％和42.5

5、％，使伴隨AngⅡ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大而出現(xiàn)的CaNmRNA表達(dá)上調(diào)呈顯著的濃度依賴性降低。L-arg10-3mol-L-1與Rb1200μg·ml-1的作用相似。NO合酶(NOS)抑制劑L-NAME10-3mol·L-1對(duì)Rb1200μg·ml-1在細(xì)胞直徑、蛋白含量、ANFmRNA表達(dá)、[Ca2+]i、CaNmRNA表達(dá)上的抑制作用無(wú)明顯影響(P＞0.05)。 結(jié)論：1.人參皂苷Rb1對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞肥大有抑制作