卷柏中單體化合物的抗輻射活性篩選及作用機理研究.pdf

1、目的:分析卷柏中單體化合物,觀察其對V79細(xì)胞和BALB/c小鼠的輻射防護作用,為探討卷柏抗輻射作用機制提供參考依據(jù)。
　　方法:1.利用CCK-8法和Gimsa染色觀察(1-8Gy)60COγ射線對V79細(xì)胞增殖和克隆形成率的影響;分別用Hoechst33258和臺盼藍(lán)染色觀察照射4、8Gy對V79細(xì)胞凋亡率和死亡率的影響;分別用活性氧檢測試劑盒和PI單染檢測照射4、8Gy對V79細(xì)胞中ROS水平和細(xì)胞周期的影響,建立V79細(xì)胞

2、輻射損傷模型,為篩選卷柏中單體化合物抗輻射活性提供參考依據(jù)。2.采用V79細(xì)胞模型篩選卷柏中單糖的抗輻射活性,通過6Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實驗進行驗證。3.采用6Gy照射AHH-1細(xì)胞模型篩選卷柏不同提取部位抗輻射活性,進一步用8Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實驗進行驗證;高效液相色譜法法對80％乙醇部位進行化學(xué)成分分析,對其中含量豐富的阿曼托雙黃酮采用V79細(xì)胞模型進行抗輻射機理研究,分別觀察輻射后細(xì)胞活力、克隆形

3、成率、細(xì)胞周期,運用6Gy照射BALB/c小鼠30天存活率實驗進行驗證。
　　結(jié)果:1.通過實驗我們發(fā)現(xiàn),60COγ射線可以劑量依賴地導(dǎo)致V79細(xì)胞死亡,隨著輻射時間延長和劑量增加,細(xì)胞活力逐漸降低。4、8Gy照射后細(xì)胞腫脹,形成空泡,死亡率顯著增加;無明顯細(xì)胞核固縮、凋亡小體出現(xiàn),流式細(xì)胞儀也檢測不到亞G1峰出現(xiàn),與正常組相比,輻射后細(xì)胞中ROS水平顯著增加,發(fā)生G2期阻滯,提示V79細(xì)胞照射4、8Gy可能是通過脹亡途徑發(fā)生細(xì)胞

4、死亡的。2.卷柏中含有葡萄糖、木糖、果糖、阿拉伯糖、海藻糖等;其中木糖、果糖、阿拉伯糖在20～200μg/mL濃度范圍內(nèi)可劑量依賴地促進照射后V79細(xì)胞增殖,在200μg/mL時可提高照射后V79細(xì)胞克隆形成率,增加S期細(xì)胞比例,緩解G2/M期阻滯,修正紊亂的細(xì)胞周期;照射前分別給予木糖100、500mg/kg可劑量依賴地提高受照射小鼠存活率達(dá)20%,30%。3.卷柏醇提總部位、80%乙醇部位可以提高6Gy照射AHH-1細(xì)胞活力,延長照

5、射8Gy死亡小鼠的平均存活天數(shù)。通過對卷柏醇提物進行化學(xué)成分分析,得到阿曼托雙黃酮含量達(dá)到13.64%;采用液相法,發(fā)現(xiàn)其主要集中在80%乙醇部位,含量為35.62%,因此對卷柏中含量豐富的阿曼托雙黃酮和酚酸類化合物香草酸進行進一步抗輻射機理研究,阿曼托雙黃酮5μg/mL、香草酸1μg/mL可以顯著促進輻射后V79細(xì)胞增殖,提高克隆形成率,緩解輻射后V79細(xì)胞G2/M期阻滯,增加G1期細(xì)胞比例。另外,與6Gy30天存活率30%相比,BA