苯乙醇苷單體抗輻射活性篩選及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：1.比較6種苯乙醇苷單體對(duì)X射線輻射損傷人皮膚成纖維細(xì)胞（Human Skin Fibroblasts，HSF）的體外輻射防護(hù)活性，從中篩選出輻射防護(hù)作用最強(qiáng)的苯乙醇苷單體并進(jìn)一步篩選其最佳體外輻射防護(hù)劑量；2.選取體外輻射防護(hù)作用最強(qiáng)的苯乙醇苷單體，研究其對(duì)輻射損傷HSF凋亡、周期及胞內(nèi)ROS水平的影響；3.探討所篩選苯乙醇苷單體對(duì)X射線輻射損傷HSF中Bcl-2、Bax、procaspase-3、ERK、JNK及磷酸化的ERK

2、、JNK蛋白異常表達(dá)的抑制作用。
　　方法：1.分別采用2 Gy、4 Gy、8Gy、16Gy、32Gy X射線對(duì)HSF進(jìn)行一次性照射，篩選并構(gòu)建最佳輻射損傷HSF模型，以MTT法檢測(cè)并比較6種苯乙醇苷單體對(duì)輻射損傷HSF增殖的影響，篩選出體外輻射防護(hù)作用最強(qiáng)的苯乙醇苷單體并進(jìn)一步篩選其最佳體外輻射防護(hù)劑量；2.選取體外抗輻射活性最強(qiáng)的苯乙醇苷單體的最佳體外輻射防護(hù)劑量對(duì)HSF進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)，采用16Gy X射線一次性照射HSF進(jìn)行

3、損傷，利用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期，熒光探針DCFH-DA檢測(cè)ROS；3.相同方法干預(yù)，利用Western blot法，檢測(cè)所篩選苯乙醇苷單體對(duì)X射線輻射損傷HSF中Bcl-2、Bax、procaspase-3、ERK、JNK及磷酸化的ERK、JNK蛋白異常表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.16Gy一次性X射線輻射對(duì)HSF體外增殖活性具有顯著的抑制作用（P<0.01）。6種苯乙醇苷單體

4、對(duì)16Gy X射線輻射損傷HSF均有不同程度體外防護(hù)作用（P<0.01），其中以毛蕊花糖苷輻射防護(hù)作用最優(yōu)，又以50μg/ml劑量組于輻射后24 h的輻射防護(hù)作用最顯著。2.與模型組比較，50μg/ml毛蕊花糖苷能夠顯著降低 X射線輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞早期凋亡率，有效減少細(xì)胞 G0/G1期阻滯，同時(shí)降低輻射損傷導(dǎo)致的ROS水平升高，其抑制輻射損傷HSF早期凋亡和減低胞內(nèi)ROS水平的作用較50μg/ml芍藥苷組更顯著。3.與模型組比較，50μg

5、/ml毛蕊花糖苷能夠有效抑制輻射損傷HSF中Bax蛋白水平升高和Bcl-2、proaspase-3蛋白水平降低，同時(shí)減少ERK和JNK的活化，從而達(dá)到減少細(xì)胞凋亡的目的。
　　結(jié)論：苯乙醇苷單體對(duì)X射線輻射損傷HSF具有明顯的體外輻射防護(hù)作用，其中以50μg/ml毛蕊花糖苷組于輻射后24 h的輻射防護(hù)活性最優(yōu)；50μg/ml毛蕊花糖苷能夠有效減少X射線輻射誘導(dǎo)的G0/G1期阻滯，減少早期細(xì)胞凋亡，降低胞內(nèi)ROS水平，提高輻射抗性；