旋復(fù)花(inulabritanical.)中抑制婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性化合物的篩選及其作用機制的研究

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文旋復(fù)花（Inula britanica L.）中抑制婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性化合物的篩選及其作用機制的研究姓名：司亞茹申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：張紅真;董玫20090301中文摘要止，分別加入空白對照磷酸鹽緩沖液、溶劑對照O ．0 5 ％- - 甲基亞砜、陽性對照順鉑( D D P ) 以及1p m o l ／L 、1 0p m o l ／L 、1 0 0p m o l ／L 單體化合物各5 0 此，

2、每組均設(shè)3 個復(fù)孔。置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 8h ，于培養(yǎng)結(jié)束前4h ，各培養(yǎng)孔加入5m g ／m L四甲基偶氮唑藍(lán)( M T T ) 1 0 止，培養(yǎng)4 ～6 h 后，棄去培養(yǎng)上清，每- 孑L ；g u 入反應(yīng)停止液1 5 0p , L ，振蕩1 0 m i n ，使結(jié)晶充分溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測各孔吸光度( O D ) 值，測定波長入= 5 7 0n m ，參考波長入= 6 2 0 n m ，并計算腫瘤細(xì)胞生存率。1 ．3 活性化合

3、物的廣譜抗腫瘤細(xì)胞增殖活性實驗選擇具有活性的單體化合物，考察活性化合物對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株( H E C ．1 ) 、人卵巢透明癌細(xì)胞株( S H I N ．3 和H O C ．2 1 ) 和人卵巢囊腺癌細(xì)胞株( H A C 一2 ) 的增殖的抑制作用。2 流式細(xì)胞儀及A n n e x i n V ．F I T C 試劑盒分析細(xì)胞凋亡細(xì)胞傳代進(jìn)入對數(shù)生長期，實驗組加入1 2 ．5I r t m o l ／L 的異土木香內(nèi)酯，空白對照組

4、加入磷酸鹽緩沖液，于培養(yǎng)4 8 h 后收集細(xì)胞，用4 ℃預(yù)冷的P B S 洗細(xì)胞兩次，用2 5 0 p , L 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，調(diào)解其濃度為1 ×1 0 6 ／m L ，取1 0 0 肛L 的細(xì)胞懸液于5m L 流式管中，加入5 “L A n n e x i n V ／F I T C 矛1 1 0 “L 2 01 ．t g ／m L 的碘化丙錠溶液，混勻后于室溫避光孵育1 5m i n ，在反應(yīng)管中力1 4 0 01