O型口蹄疫病毒VP1基因及IL-18基因重組痘苗病毒的構(gòu)建及免疫原性初步研究.pdf

1、口蹄疫(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。主要特征為口腔粘膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰，被世界動物衛(wèi)生組織列為A類傳染病之首。該病不僅影響畜產(chǎn)品的生產(chǎn)，還可導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失和嚴(yán)重的政治問題。本研究利用細(xì)胞內(nèi)同源重組法將O型FMDV VP1基因以及白介素基因(IL-18)與痘苗病毒載體重組，以期獲得針對口蹄疫病的免疫性強(qiáng)的重組痘苗病毒，為該病的預(yù)防提供理

2、論基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)GenBank登錄的O型口蹄疫病毒VP1基因和白介素基因(IL-18)序列，分別設(shè)計引物，PCR擴(kuò)增得到VP1基因和IL-18基因。將鑒定正確的VP1和IL-18基因克隆到VV(Vaccinia Virus)重組載體上，構(gòu)建含有VP1和IL-18基因的重組痘苗病毒轉(zhuǎn)移載體。將構(gòu)建好的這兩個痘苗病毒轉(zhuǎn)移載體與痘病毒弱毒株共轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞，經(jīng)篩選、鑒定從而得到rVV-VP1和rVV-IL18兩株重組痘苗病毒，并對

3、rVV-VP1的細(xì)胞裂解物表達(dá)的VP1蛋白進(jìn)行Western blot檢測，利用正向間接血凝抗原實(shí)驗(yàn)來檢測rVV-VP1株免疫小鼠后其體內(nèi)抗體水平。
　　 本研究把試驗(yàn)動物分為四組：分別為rVV-vp1組、rVV-VP1+rVV-IL18組、滅活的牛O型口蹄疫疫苗、牛O型口蹄疫合成肽疫苗。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，rVV-VP1+rVV-IL18組產(chǎn)生的抗體效價高于rVV-vp1組體現(xiàn)了IL-18可能成為疫苗免疫佐劑的良好前景，也為進(jìn)一步開