香蕉與龍眼轉化受體系統(tǒng)建立及轉化PEAS基因初步研究.pdf

1、該研究分別以香蕉(Musa spp.)品種天寶蕉(AAA類型)試管苗莖尖的橫切薄片和龍眼(Dimocarpus longan Lour.)品種"紅核子"幼胚誘導并長期繼代保持的胚性愈傷組織(Embryogenic calli,簡稱EC)作為試驗材料,建立了香蕉與龍眼基因轉化的受體系統(tǒng),并采用根癌農(nóng)桿菌介導法進行香蕉和龍眼轉化的初步研究.主要試驗結果如下:1、建立了香蕉基因轉化的適宜受體系統(tǒng).采用橫切薄層培養(yǎng)方法建立了香蕉的高效再生系統(tǒng).

2、結果發(fā)現(xiàn):在30℃、黑暗培養(yǎng)15d,而后轉入24℃、光照培養(yǎng)5d的香蕉橫切薄層的出芽率較高,植株生長較健壯,適宜用作轉基因的受體;羧芐青霉素對香蕉薄片的生長沒有明顯的抑制作用,可以作為轉化的抑菌劑;香蕉對潮霉素比較敏感,能夠顯著抑制香蕉橫切薄層的出芽率,確定用40mg/L的潮霉素作為篩選的工作濃度.2、建立了龍眼基因轉化的適宜受體系統(tǒng).采用生長量測定的方法確定了繼代培養(yǎng)10-15d的龍眼EC生長速度最快,生活力最強,適宜用作轉基因的受體

3、;同時采用生長量測定結合定性觀察發(fā)現(xiàn)高濃度的潮霉素嚴重抑制龍眼EC的生長,確定50mg/L為有效的篩選濃度.3、進行了對香蕉和龍眼基因轉化的初步研究.采用根癌農(nóng)桿菌(帶hpt基因)介導的方法進行了目的基因PEAS導入香蕉橫切薄片和龍眼胚性愈傷組織的研究.采用附加潮霉素的篩選培養(yǎng)基對感染后的材料進行篩選,共得到10個系列的香蕉抗性芽和5個龍眼抗性細胞系.由于時間的關系,對這些抗性芽和抗性EC的分子檢測只進行了hpt抗性基因的PCR初步檢測