多次傳代和致細(xì)胞病變豬瘟E2基因序列分析及病變細(xì)胞中DI顆粒的檢測(cè).pdf

1、　　本文利用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技術(shù)，對(duì)多次動(dòng)物傳代和致血管內(nèi)皮細(xì)胞病變的豬瘟病毒石門株E2基因的核苷酸序列進(jìn)行了測(cè)定，并與標(biāo)準(zhǔn)石門株的核苷酸及氨基酸序列的同源性進(jìn)行比較及分析，以期了解豬瘟主要保護(hù)性抗原E2基因的變異情況，為豬瘟的防制提供分子流行病學(xué)方面的資料。同時(shí)用豬瘟病毒石門株脾毒接種分離培養(yǎng)的豬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，在引起細(xì)胞病變后，用Northern雜交技術(shù)對(duì)病變細(xì)胞中有無(wú)病毒DI顆粒的存在進(jìn)行檢

2、測(cè)，對(duì)豬瘟病毒石門株致豬血管內(nèi)皮細(xì)胞病變的機(jī)制進(jìn)行探討。主要試驗(yàn)和結(jié)果如下：(1)采用RT-PCR和nPCR技術(shù)擴(kuò)增出經(jīng)豬體多次傳代豬瘟病毒石門株脾毒E2基因，將其克隆于pMD18-T載體并進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，用DNAstar軟件比較分析脾毒E2基因與標(biāo)準(zhǔn)石門株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脾毒和標(biāo)準(zhǔn)石門株的核苷酸序列同源性為99.4﹪，氨基酸序列同源性為99.0﹪，通過對(duì)主要抗原區(qū)域氨基酸位點(diǎn)變異進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)E2基因抗原決

3、定簇未發(fā)生明顯的變異。(2)用豬瘟脾毒接種豬血管內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)引起細(xì)胞病變的細(xì)胞毒E2基因進(jìn)行克隆測(cè)序，比較分析細(xì)胞毒E2基因與標(biāo)準(zhǔn)石門株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞毒標(biāo)準(zhǔn)石門株的核苷酸序列同源性為98.3﹪，氨基酸同源性為96.7﹪，通過對(duì)主要抗原區(qū)域氨基酸位點(diǎn)變異進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)E2基因的變異也比較小，但發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒E2基因較多次傳代脾毒的變異大，說(shuō)明豬瘟病毒在豬體比組織培養(yǎng)的遺傳穩(wěn)定性高。(3)根據(jù)資料，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出豬