豬瘟分離毒E2基因序列分析和強(qiáng)弱毒檢測(cè)方法的探討.pdf

1、本文以豬瘟流行毒自然感染發(fā)病豬的脾臟為材料，提取組織總RNA，根據(jù)已報(bào)道的CSFVE2基因序列設(shè)計(jì)合成特異性引物，以組織總RNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測(cè)定技術(shù)，對(duì)流行于江蘇地區(qū)流行毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列進(jìn)行了測(cè)定，用DNAStar軟件比較分析了5株流行毒之間以及它們與豬瘟兔化弱毒株(C-株)E2基因的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列的同源性，分析了豬瘟流行毒的變異程度及其與C-株的分子差異，并通過

2、系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，確定其遺傳關(guān)系，從分子生物學(xué)角度研究造成目前豬瘟仍頻繁發(fā)生的可能原因。 在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)已發(fā)表的強(qiáng)毒株石門株(SM株)、Brescia株、Altort-187株、Esystrup株和弱毒株GPE株、CS株、Riems株和C-株的序列進(jìn)行酶切位點(diǎn)分析，找到強(qiáng)毒株在282bp處有一個(gè)AvaⅠ(BmeT110Ⅰ)酶切位點(diǎn)而弱毒株卻沒有。接著我們用限制性片段長度多態(tài)性分析法(RFLP)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析。從本研究結(jié)果