利用轉錄因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐鹽性研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文利用轉錄因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐鹽性研究姓名：李南羿申請學位級別：博士專業(yè)：植物病理與分子生物學指導教師：郭澤健20050501小于干涉轉基因株系和未轉基因植株，表明T2代增強表達轉基因植株對稻瘟病有較好的抗性，轉基因植株對稻瘟病的抗性能穩(wěn)定遺傳。進一步Northern雜交分析OsiWRKY基因在干涉轉基因植株和增強轉基因植株，以及未轉基因對照在稻瘟病接種0h、24h時的表達情況。雜交結果顯

2、示，在干涉轉基因植株中內源OsiWRKY基因的誘導表達被抑制，轉基因植株的抗病性與OsiWRKY基因的表達呈一定的正相關性。OsiWRKY基因可能作為一種關鍵的正調控因子參與水稻的廣譜抗性。3為進一步了解OsiWRKY基因所參與調控的抗瘸分子機理，分析了尸R基因(PAL。PBZl)在干涉和增強表達轉基因植株，以及未轉基因植株對照在稻瘟病接種0h、24h時的表達情況。PAL在增強表達轉基因植株中組成型表達表明，PAL可能是受OsiWRKY

3、基因調控的下游基因。在稻瘟病誘導表達下，PAL、尸B引均有誘導增強表達，說明OsiWRKY基因參與了水稻防衛(wèi)反應的激活過程，通過調控PAL和PBZl的離水平誘導表達是提高轉基因植株抗病性的關鍵因素。4采用基因槍法將具耐鹽和抗病功能的。川i尸J基因和OsiWRKY基因共同轉入水稻中。轉基因植株經PCR鑒定，Southern雜交分析表明OPBPl基因和OsiWRKY基因己成功的整合到水稻基因組中。Northern雜交結果表明，OPBPl和O

4、siWRKY基因在轉基因植株中有不同程度的表達。轉基因抗病性鑒定結果表明，與未轉基因的株系相比，大部分轉基因株系對稻瘟病菌和白葉枯病菌均表現(xiàn)出較好的抗性。轉基因植株耐鹽能力測定表明，在200mMNaCl脅迫24h的情況下，有61％的未轉基因對照植株枯萎，轉基因株系枯萎率在1015％范圍的有3個株系，有4個株系枯萎率在30％左右。在100mMNaCI中脅迫2周后，轉基因株系比未轉基因對照的生長狀況要好，生物學產量有顯著提高。隨著鹽脅迫時間