利用轉(zhuǎn)錄因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐鹽性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文利用轉(zhuǎn)錄因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐鹽性研究姓名:李南羿申請學(xué)位級別:博士專業(yè):植物病理與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:郭澤健20050501小于干涉轉(zhuǎn)基因株系和未轉(zhuǎn)基因植株,表明T2代增強(qiáng)表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株對稻瘟病有較好的抗性,轉(zhuǎn)基因植株對稻瘟病的抗性能穩(wěn)定遺傳。進(jìn)一步Northern雜交分析OsiWRKY基因在干涉轉(zhuǎn)基因植株和增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植株,以及未轉(zhuǎn)基因?qū)φ赵诘疚敛〗臃N0h、24h時(shí)的表達(dá)情況。雜交結(jié)果顯

2、示,在干涉轉(zhuǎn)基因植株中內(nèi)源OsiWRKY基因的誘導(dǎo)表達(dá)被抑制,轉(zhuǎn)基因植株的抗病性與OsiWRKY基因的表達(dá)呈一定的正相關(guān)性。OsiWRKY基因可能作為一種關(guān)鍵的正調(diào)控因子參與水稻的廣譜抗性。3為進(jìn)一步了解OsiWRKY基因所參與調(diào)控的抗瘸分子機(jī)理,分析了尸R基因(PAL。PBZl)在干涉和增強(qiáng)表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株,以及未轉(zhuǎn)基因植株對照在稻瘟病接種0h、24h時(shí)的表達(dá)情況。PAL在增強(qiáng)表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株中組成型表達(dá)表明,PAL可能是受OsiWRKY

3、基因調(diào)控的下游基因。在稻瘟病誘導(dǎo)表達(dá)下,PAL、尸B引均有誘導(dǎo)增強(qiáng)表達(dá),說明OsiWRKY基因參與了水稻防衛(wèi)反應(yīng)的激活過程,通過調(diào)控PAL和PBZl的離水平誘導(dǎo)表達(dá)是提高轉(zhuǎn)基因植株抗病性的關(guān)鍵因素。4采用基因槍法將具耐鹽和抗病功能的。川i尸J基因和OsiWRKY基因共同轉(zhuǎn)入水稻中。轉(zhuǎn)基因植株經(jīng)PCR鑒定,Southern雜交分析表明OPBPl基因和OsiWRKY基因己成功的整合到水稻基因組中。Northern雜交結(jié)果表明,OPBPl和O

4、siWRKY基因在轉(zhuǎn)基因植株中有不同程度的表達(dá)。轉(zhuǎn)基因抗病性鑒定結(jié)果表明,與未轉(zhuǎn)基因的株系相比,大部分轉(zhuǎn)基因株系對稻瘟病菌和白葉枯病菌均表現(xiàn)出較好的抗性。轉(zhuǎn)基因植株耐鹽能力測定表明,在200mMNaCl脅迫24h的情況下,有61%的未轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓昕菸?,轉(zhuǎn)基因株系枯萎率在1015%范圍的有3個(gè)株系,有4個(gè)株系枯萎率在30%左右。在100mMNaCI中脅迫2周后,轉(zhuǎn)基因株系比未轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏纳L狀況要好,生物學(xué)產(chǎn)量有顯著提高。隨著鹽脅迫時(shí)間

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