冷應(yīng)激仔豬四種組織中HSP70表達(dá)與其mRNA轉(zhuǎn)錄及激素變化規(guī)律.pdf

1、用14頭50日齡，體重為15kg±1kg的雄性“軍牧一號”仔豬進(jìn)行冷應(yīng)激試驗(yàn)來探討HSP70及其mRNA隨著應(yīng)激時間的變化而發(fā)生變化的規(guī)律及兩者之間的相關(guān)關(guān)系。仔豬正常飼養(yǎng)溫度為18℃。試驗(yàn)前和期間自由采食和飲水，在-5℃～-10℃進(jìn)行冷應(yīng)激刺激。采樣時間分別為應(yīng)激0h，0.5h，3h，6h，12h，24h，應(yīng)激恢復(fù)0.5h，3h，6h，12h，24h，48h共12個時間點(diǎn)進(jìn)行采樣。在每個時間點(diǎn)各屠宰一頭豬，取肝臟、脾臟和股二頭肌樣品并

2、迅速置于液氮中保存；每個時間點(diǎn)前腔靜脈各取抗凝血10mL，并迅速分離淋巴細(xì)胞，置于-84℃超低溫冰箱冷凍保存。 本試驗(yàn)采用免疫印跡和實(shí)時定量RT-PCR方法檢測應(yīng)激前后不同時間仔豬肝臟、脾臟、肌肉和淋巴細(xì)胞中HSP70的表達(dá)量及其mRNA的轉(zhuǎn)錄量，并采用放射免疫分析法測定應(yīng)激前后不同時間血清中激素濃度，試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果如下：(1)正常狀態(tài)下，HSP70有一定的基礎(chǔ)表達(dá)量，應(yīng)激0.5h，淋巴細(xì)胞內(nèi)HSP70的

3、表達(dá)水平迅速升高(p＜0.05)，但隨之逐漸下降。雖有波動趨勢，但變化并不顯著(p＞0.05)。應(yīng)激6h，12h的HSP70的表達(dá)量與原始基礎(chǔ)量差異極顯著(p＜0.01)。應(yīng)激恢復(fù)6h，HSP70的表達(dá)量又逐漸上升(p＜0.05)，至應(yīng)激恢復(fù)24h后，表達(dá)量降到接近于基礎(chǔ)量水平。仔豬肝臟、脾臟和肌肉中HSP70的表達(dá)量都以不同的速度升高，而后呈現(xiàn)與淋巴細(xì)胞相似的變化趨勢。(2)在正常狀態(tài)下仔豬肝臟、脾臟、肌肉和淋巴細(xì)胞中HSP70mRN

4、A有一定的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄量；冷應(yīng)激0.5h，淋巴細(xì)胞內(nèi)HSP70mRNA轉(zhuǎn)錄量也迅速升高(p＜0.05)。冷應(yīng)激3h，轉(zhuǎn)錄量下降但冷應(yīng)激6h稍微上升。HSP70mRNA豐度在應(yīng)激6h上升到一定程度后呈不斷下降的趨勢。直到應(yīng)激恢復(fù)3h，轉(zhuǎn)錄量呈上升趨勢，到應(yīng)激恢復(fù)24h，已經(jīng)達(dá)到峰值，到48h下降到基礎(chǔ)量水平。肝臟、脾臟、肌肉HSP70mRNA的總體變化趨勢與淋巴細(xì)胞HSP70mRNA相同。(3)血清促腎上腺皮質(zhì)激素濃度呈現(xiàn)先逐漸上升再下降的趨

5、勢，但變化不明顯(p＞0.05)。血清皮質(zhì)醇濃度在應(yīng)激前后變化比較明顯。應(yīng)激0.5h，血清皮質(zhì)醇濃度迅速升高(p＜0.05)。隨后逐漸下降，到應(yīng)激恢復(fù)0.5h，血清皮質(zhì)醇濃度與應(yīng)激3h相比差異顯著(p＜0.05)；與應(yīng)激6h比較差異極顯著(p＜0.01)。甲狀腺激素分游離和結(jié)合型激素，其濃度變化曲線都呈先升高后降低的趨勢，血清中FT3與FT4的濃度變化與基礎(chǔ)濃度比較差異顯著(p＜0.05)，而T3和T4濃度變化不明顯(p＞0.05)。