16022.重金屬對(duì)hela細(xì)胞中熱激蛋白70(hsp70)表達(dá)的影響

1、I摘要熱激蛋白（Heatshockproteins，HSPs）是一組廣泛存在于原核和真核細(xì)胞中的蛋白質(zhì)。它們是一類可以調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)并保護(hù)機(jī)體防止細(xì)胞損傷的功能相關(guān)蛋白質(zhì)，在機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)中具有重要作用。熱激蛋白按照分子量的大小，可以大致分為HSP110，HSP90，HSP70，HSP60，HSP40以及小分子量熱激蛋白。其中HSP70是熱激蛋白家族中最保守、最重要的一族，在細(xì)胞應(yīng)激后反應(yīng)最明顯，對(duì)維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和提高細(xì)胞對(duì)應(yīng)激原的耐

2、受性發(fā)揮重要作用。Cd2，Cu2，Zn2這三種重金屬是普遍存在的環(huán)境污染物，對(duì)人體和動(dòng)物的一些主要器官造成損傷。HeLa細(xì)胞來(lái)自于宮頸癌細(xì)胞，并且增殖迅速，所以它們作為理想的細(xì)胞用于科學(xué)研究中。本實(shí)驗(yàn)以HeLa細(xì)胞（子宮腫瘤細(xì)胞）為材料，采用不同濃度的Cd2，Cu2，Zn2三種重金屬物質(zhì)誘導(dǎo)細(xì)胞，并利用免疫熒光染色（IFS），SDSPAGE，Westernblotting和RTPCR四種手段來(lái)研究重金屬對(duì)HSP70表達(dá)的影響。獲得主要結(jié)

3、果如下：1.RTPCR法研究HSP70基因轉(zhuǎn)錄水平HSPs的表達(dá)在受到熱刺激或其他壓力刺激下會(huì)顯著升高。通過(guò)RTPCR實(shí)驗(yàn)研究我們發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)50100MCd2處理后的HeLa細(xì)胞，HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄水平隨著金屬濃度的增加而顯著升高。與對(duì)照組相比，經(jīng)過(guò)100200MCu2和Zn2處理后的細(xì)胞，其HSP70均顯著表達(dá)，且Cu2和Zn2對(duì)HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄影響相當(dāng)。在這三種重金屬之中，Cd2具有最大的毒害程度。2.Westernb

4、lotting法研究HSP70蛋白表達(dá)水平當(dāng)Cd2的濃度為0100M時(shí)，HSP70蛋白條帶逐漸加深，濃度為200M時(shí)，條帶顏色變?nèi)?，有可能是因?yàn)檫^(guò)高的金屬濃度破壞了HeLa細(xì)胞的新陳代謝，某些機(jī)制抑制了HSP70的合成。當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過(guò)100M和200M的Zn2和Cu2處理時(shí)，HSP70的表達(dá)量增加，與金屬的濃度成正比。3.免疫熒光染色（IFS）法研究HSP70蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比較，當(dāng)Cd2濃度較低時(shí)（25M），HSP70的表達(dá)水平無(wú)顯