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文檔簡介
1、選擇昆明白雌性小鼠作為試驗動物,以37℃2h條件下正常體外培養(yǎng)為對照,將體外培養(yǎng)至擴張囊胚(hCG后113h)的小鼠胚胎分別施以38℃2h、39℃2h和40℃2h的預熱應激處理,然后分別將預熱胚胎和對照組胚胎置于42℃高溫下處理3h,以觀察熱休克蛋白70(HSP70)表達對高溫所致胚胎損傷的影響.用Westernblot技術檢測小鼠囊胚內HSP70的表達;臺盼蘭染色后體視顯微鏡觀察熱應激后囊胚的死亡與畸形,計算存活率。以研究小鼠囊胚的熱
2、敏性、熱應激對小鼠囊胚HSP70表達的影響以及囊胚熱耐受的獲得與HSP70表達之間的關系,判斷HSP70增量表達對胚胎抵抗高溫損傷有無保護作用。試驗結果如下:
1.熱應激對囊胚存活率的影響
38℃2h、39℃2h和40℃2h不同溫度熱應激處理各組囊胚存活率(分別為83.01%、69.11%和63.51%)均低于對照組(94.01%)。39℃2h和40℃2h與對照組相比差異極顯著(P<0.01),38℃2h與對
3、照組之間差異顯著(P<0.05);囊胚存活率在39℃2h和40℃2h組間無顯著差異(P>0.05)。
2.誘導熱應激對囊胚存活率的影響
在不同溫度誘導熱應激組中,先經(jīng)38℃2h、39℃2h和40℃2h預熱應激處理,再經(jīng)42℃高溫處理3h后囊胚的存活率(25.16%、36.37%和22.81%)均高于直接42℃3h熱應激組(13.07%)。其中39℃熱誘導2h囊胚存活率為最高(36.37%),與直接42℃3h熱
4、應激處理組(13.07%)相比差異顯著(P<0.05).在39℃不同時間誘導熱應激組中,先經(jīng)39℃3h熱誘導,再經(jīng)42℃3h熱應激后囊胚的存活率(38.81%)極顯著(P<0.01)高于對照組(15.15%).39℃1h和39℃2h熱誘導組存活率(32.81%和34.92%)顯著(P<0.05)高于對照組(15.15%),但39℃1h和39℃2h熱誘導組之間差異不顯著(P>0.05)。
3.不同溫度預熱應激對囊胚HSP70
5、表達的影響
經(jīng)Westernblot檢測,38℃2h,39℃2h和40℃2h預熱應激組內囊胚HSP70表達量較37℃對照組均增加。39℃熱應激處理2h囊胚HSP70表達量(0.839)極顯著(P<0.01)高于對照組(0.781);38℃熱應激處理2h和40℃熱應激處理2h囊胚HSP70表達量(0.806和0.810)也顯著(P<0.05)高于對照組(0.781),
4.不同時間預熱應激對囊胚HSP70表達的
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