18015.草魚pkz的功能分析

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名(手寫)：刪2簽字日期：勿億年汐鑰／／日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全

2、了解南昌大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名：簽字曰期：年月日導師簽名：矧d

3、彭tj0“簽字日期：年月日摘要IUIIIllIIIlUlUIIIlY2142307摘要PKR1ike(PKZ)是近年來在鯽魚、斑馬魚(Daniorerio)、大西洋鮭(Salmosalar)、稀有觴鯽(Gobiocyprisrarus)禾l草魚(Ctenopharyngodonidella)中報道的一個蛋白激酶，由于其N端為ZDNA結(jié)合域(Z0【)，因此，將它命名為PKZ(proteinkinasecontainingZDNAbindi

4、ngdomain)。有趣的是，PKZ的C一端也具有12個保守的elF20t激酶催化域，與PKR(double—strandedRNAdependentproteinkinase)非常相似。初步研究表明PKZ與PKR非常相似，也與宿主細胞抗病毒有關。如魚類PKZ基因的本底表達非常微弱，當干擾素等誘導后，表達上調(diào)。此外，與其elF20t激酶家族其他成員一樣，斑馬魚PKZ、大西洋鮭PKZ也能夠抑制細胞蛋白質(zhì)的合成。盡管如此，對ZDNA如何調(diào)節(jié)

5、及激活魚類PKZ還不清楚?；诖?，我們根據(jù)本實驗室已克隆的草魚尸艘1ike(PKZ)(GU299765)，構建了原核表達載體，并在體外進行表達、純化。對所得草魚PKZ全長蛋白進行功能分析表明：原核表達的草魚PKZ本身就已經(jīng)被磷酸化了。以磷酸酶使之去自磷酸化后，PKZ就失去了激酶活性。我們還發(fā)現(xiàn)ZDNA可以使去白磷酸化的PKZ重新激活，然后磷酸化elF20t。而PolyI：C卻無法使之重新活化。體內(nèi)實驗表明：草魚PKZ能夠在翻譯水平上極大

6、地抑制熒光素酶的產(chǎn)生，說明它能夠抑制蛋白質(zhì)的翻譯。其198位點突變后，幾乎完全失去阻礙翻譯的功能。此外，調(diào)節(jié)區(qū)Za的缺失對其功能也影響極大。另外，草魚PKZ啟動子的序列分析表明其上存在干擾素調(diào)節(jié)因子I(IRF—1)的結(jié)合位點?；诖?，我們利用原核表達的IRF一1的多肽與PKZ啟動子序列進行了瓊脂糖凝膠阻滯實驗，結(jié)果表明，IRF1可與PKZ啟動子結(jié)合。這個結(jié)果為我們構建真核表達載體，進一步在體內(nèi)分析二者的結(jié)合情況，以及探索IRF一1調(diào)控草