土壤中幾種農(nóng)藥殘留及生物材料中分子信使H2S和神經(jīng)遞質(zhì)的衛(wèi)生檢測新方法研究.pdf

1、第一部分：在線固相萃取-高效液相色譜法測定土壤中五種新煙堿類農(nóng)藥殘留方法的建立
　　目的：建立在線固相萃取-高效液相色譜同時檢測土壤中吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲嗪、噻蟲啉、烯啶蟲胺五種新煙堿類農(nóng)藥殘留的新方法。
　　方法：土壤樣品經(jīng)二氯甲烷：乙腈（19:1，v/v）超聲提取，離心后取上清液，氮吹濃縮后復溶進樣，PEP固相萃取柱在線凈化。使用雙梯度液相色譜系統(tǒng)的右泵，以二乙胺水溶液-乙腈為流動相，梯度洗脫；通過閥切換將保留在固相萃取

2、柱上的待測物轉(zhuǎn)移到分析柱（C18，4.6 mm250 mm，5μm）中進行二次分離，DAD檢測器多波長檢測，外標法定量。
　　結(jié)果：五種農(nóng)藥在0.01~2.00 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均在0.9999以上，檢出限0.005~0.010 mg/L（S/N=3）。五種農(nóng)藥在土壤樣品中的檢出限為0.01~0.02 mg/kg。八種土壤樣品0.05、0.10、0.50 mg/kg添加水平的加標回收率分別為72.54％~1

3、11.28%，77.99%~110.34%，72.7%~119.42%，相對標準偏差均低于9.64%。
　　結(jié)論：該方法操作簡單、成本低廉且重現(xiàn)性好，可用于城市公共綠地土壤中五種新煙堿類農(nóng)藥的測定。
　　第二部分：在線凈化-高效液相色譜雙檢測器法同時測定土壤中七種農(nóng)獸藥殘留方法的建立
　　目的：建立在線凈化-雙檢測器-高效液相色譜同時檢測土壤中磺胺
　　脒、磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、烯啶蟲胺、吡蟲啉、噻蟲啉、多菌靈7

4、種農(nóng)獸藥殘留的新方法。
　　方法：土壤樣品經(jīng)提取液（甲醇:乙腈:二氯甲烷=5:4:1，v/v/v）提取，氮吹濃縮后直接進樣，經(jīng)在線固相萃取（SPE）柱在線凈化，梯度洗脫經(jīng)反相C18色譜柱分離，二極管陣列（DAD）檢測器串聯(lián)熒光（FLD）檢測器檢測，外標法定量，12 min內(nèi)即可完成7種農(nóng)獸藥的檢測。
　　結(jié)果：7種農(nóng)藥檢出限為1.1~3.0×10-3 mg/kg（S/N=3），線性范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)均在0.9999以上?？瞻?/p>

5、土壤樣品在0.05、0.10、0.32 mg/kg添加水平的平均加標回收率為71.92%~103.88%，相對標準偏差為0.07%~5.67%。
　　結(jié)論：該法操作簡便、檢測快速，準確度、靈敏度高，適用于土壤中7種農(nóng)獸藥殘留的定性和定量。
　　第三部分：柱前衍生-高效液相色譜測定血漿中硫化氫新方法的建立及應用
　　目的：建立柱前衍生-高效液相色譜法測定小鼠血漿中的內(nèi)源性硫化氫含量的新方法，用以觀察百草枯（PQ）中毒小鼠

6、血漿中硫化氫（H2S）水平的變化，初步探討大蒜素（DATS）作為H2S外源性供體對中毒小鼠進行干預治療的可能。
　　方法：健康ICR小鼠隨機分為4組：正常對照組（第1組）、大蒜素對照組（第2組）、百草枯染毒組（第3組）和大蒜素干預組（第4組）。第3、4組小鼠灌胃給予PQ35 mg/kg建立中毒模型。第2、4組在造模2 h、26 h、50 h后，腹腔注射大蒜素25 mg/kg；第1、3組腹腔注射同體積生理鹽水。于末次給藥12 h后，

7、麻醉、取血后離心分離血漿。采用傳統(tǒng)熒光探針單溴二胺（MBB）的同分異構(gòu)體MMB對待測血漿樣品進行50 ℃避光衍生后，使用Acclaim120 C18 Column（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進行梯度洗脫，測定小鼠血漿中內(nèi)源性硫化氫的含量。
　　結(jié)果：該方法的衍生產(chǎn)物在0.2~300.0 nmol/mL濃度范圍內(nèi)線性良好(r≥0.999)，最低檢測濃度為0.03 nmol/mL，血漿中高中低三水平的加樣回收率為94.

8、7%~101.5%，RSD均不大于6.86%。動物實驗中，第3組血漿中H2S含量較第1組明顯減低(P<0.05)；第4組血漿中H2S含量明顯高于第3組(P<0.05)。
　　結(jié)論：實驗結(jié)果表明，與單純?nèi)径窘M對比，大蒜素干預后可以抑制百草枯中毒小鼠血漿中 H2S含量的降低。但是尚需要大規(guī)模、長療程的試驗來證實大劑量給予大蒜素是否安全以及是否可以作為臨床治療百草枯中毒患者的一種輔助方法。
　　第四部分：高效液相色譜-電化學檢測法

9、研究大蒜素對百草枯中毒小鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響
　　目的：建立單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的高效液相色譜-電化學檢測方法，用于探討大蒜素對百草枯中毒小鼠腦組織內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響。
　　方法：
　　1.健康ICR小鼠隨機分為4組：正常對照（Con）組、大蒜素（DATS）組、百草枯染毒（PQ）組和大蒜素治療（PQ+DATS）組，每組6只。PQ組灌胃PQ35 mg/kg建立中毒模型，Con組和DATS組灌服同

10、體積生理鹽水。DATS組和PQ+DATS組小鼠于造模2 h、26 h和50 h后腹腔內(nèi)各注射一次DATS（25 mg/kg），PQ組和正常組小鼠腹腔內(nèi)注射等量無菌生理鹽水。造模12 h后處死小鼠。收集小鼠腦組織樣品并稱重，處理后進樣。
　　2.色譜分析采用 Acclaim120 C18 Column（150 mm×2.1 mm，3μm）色譜柱，以離子對緩沖鹽溶液-甲醇（93:7，v/v）為流動相，流速為0.27 mL/min；電化

11、學檢測器檢測，工作電壓為450 mV。
　　結(jié)果：
　　1.與正常組和 DATS組比較，PQ組部分神經(jīng)遞質(zhì)水平降低；DATS治療后能夠改變上述生化指標變化；與PQ組相比，PQ+DAS組神經(jīng)遞質(zhì)含量增高，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.腦組織樣品中5-HT、DA、5-HIAA、DOPAC和HVA低、中、高三水平加樣回收率均在79.8%~103.0%之間，RSD均不大于10%。
　　結(jié)論：本方法檢測腦