11060.槲皮素降解菌株的篩選鑒定、代謝產(chǎn)物的檢測及生物活性

1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文題名（中英對照）：槲皮素降解菌株的篩選鑒定、代謝產(chǎn)物的檢測及生物活性Screeningidentificationofbacteriametabolizingquercetindeterminationbiologicalactivityofmetabolites作者姓名：張志超指導(dǎo)教師姓名彭喜春及學(xué)位、職稱：博士副教授學(xué)科、專業(yè)名稱：工學(xué)食品科學(xué)論文提交日期：2014年5月15號論文答辯日期：2014年6月3號答辯

2、委員會主席：吳暉教授論文評閱人：方祥教授張寧副教授學(xué)位授予單位和日期：暨南大學(xué)年月日I摘要摘要槲皮素具有非常廣泛的潛在生物學(xué)特性，在人類日常攝食過程中，小部分槲皮素在經(jīng)過小腸的吸收消化后剩余部分則經(jīng)過結(jié)腸并被結(jié)腸中的微生物群降解，而對這一過程的研究甚少，這將改變槲皮素本身的生物學(xué)特性，并對人體自身的健康有著潛在性的重要影響。本文利用體外發(fā)酵，從人源新鮮糞便中分離鑒定出能夠發(fā)酵槲皮素的腸道菌種，通過高效液相色譜（HighPerfmance

3、LiquidChromatographyHPLC）以及質(zhì)譜（MassSpectrometryMS）對發(fā)酵產(chǎn)物進行分離鑒定，并通過抗氧化實驗、癌細(xì)胞增殖抑制實驗以及對常見致病菌的抑菌試驗來考察菌株發(fā)酵液的生理生化特性。研究結(jié)果如下：（1）本文通過在槲皮素脅迫作用下，從健康成人糞便中經(jīng)篩選、分離以及16SrDNA分子測序，得到能夠降低體系中槲皮素含量的7株菌株，分別是：大腸埃希氏菌（Escherichiacoli），巴黎鏈球菌（Streto

4、coccuslutetiensis），嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus），融合魏斯氏菌（Weissellaconfusa），灰黃色腸球菌（Enterococcusgilvus），產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridiumperfringens）和脆弱擬桿菌（Bacteroidesfragilis）。并且通過驗證實驗證明產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）和脆弱擬桿菌（B.fragilis）能夠降解槲皮素95%

5、以上，且生成某未知物，而剩余菌株則能夠部分降低體系中槲皮素含量，故該7株腸道菌株具有不同程度的槲皮素降解率和不同的降解方式。（2）通過收集產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）和脆弱擬桿菌（B.fragilis）中的未知組分，經(jīng)MS檢測后對比特征性分子離子碎片，鑒定出未知物代謝產(chǎn)物為34二羥基苯乙酸，而其他菌株暫未檢出。將各個菌株的發(fā)酵產(chǎn)物混合液（MixturesolutionofcatabolitesMSCs）進行抗氧化能力的測定

6、，發(fā)現(xiàn)所有菌株的MSCs的抗氧化能力在原始槲皮素添加量達到1mgmL的時候達到最高值，并且產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）和脆弱擬桿菌（B.fragilis）的MSCs表現(xiàn)出較高的自由基清除能力，但是對比槲皮素本身的自由基清除能力則有所下降。（3）將各個菌株的MSCs進行癌細(xì)胞增殖抑制率的測定，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）和脆弱擬桿菌（B.fragilis）的代謝產(chǎn)物對人結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT116）產(chǎn)生了較強的