安徽碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源的RAPD研究.pdf

1、安徽碭山地區(qū)梨資源豐富,碭山酥梨在世界水果市場占據(jù)重要地位.由于梨遺傳背景復雜,種內(nèi)變化大,加上種間雜交,使碭山地區(qū)梨在長期的進化和栽培中形成了豐富的資源類型.對碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源進行研究,以達到合理利用這些資源,對加快梨育種進程有重要意義.該試驗調(diào)查并收集了碭山地區(qū)梨24個資源類型,進行RAPD研究,主要結果如下:1、以CTAB法和SDS法提取了幼葉、成熟葉、韌皮部和芽中的DNA,通過純度、顏色、產(chǎn)率、電泳,擴增結果等比較,認為CTA

2、B法更適合梨基因組DNA提取.用幼葉提取的DNA,質(zhì)量好,產(chǎn)率高;成熟葉用改良CTAB法提取也可得到適于RAPD分析的DNA;韌皮部和芽用上述兩種方法提取,DNA產(chǎn)率均較低.2、用正交設計篩選出適合梨樹的RAPD反應參數(shù)為:在25 μl反應體系中,模板DNA 60ng、引物4pmol、dNTPs 5×10<'-9>mol、10×PCR Buffer 2.0 μl、MgCl<,2> 5×10<'-8>mol、Taq酶1.0U.3、運用6個

3、引物的特異帶構建出的梨DNA指紋圖譜,可區(qū)分14個生物型中的9個.用8個引物的帶型組合構建的指紋圖譜,可將這14個資源類型全部區(qū)分.4、從60個隨機引物中篩選出40個表現(xiàn)穩(wěn)定的引物進行PCR擴增.碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源聚類分析表明,當閥值為68.6~70.4時,全部生物型可分為5類.第一類:碭山酥梨及其變異、鴨梨、雪花梨、萊陽慈梨和紫酥,主要是白梨;第二類:新高、豐水、二十世紀、皇冠和蒼溪梨,除皇冠外,都為沙梨;庫爾勒香梨和紅香酥聚為一類;

4、伏酥和豆梨各為一類.5、逐步判別分析顯示,Fisher判別函數(shù)值只與引物S<,54> 1500bp,S<,58> 1375bp,S<,58> 947bp和S<,1461>831bp 4個位點有關,判別函數(shù)為:Y<,1>=-27X<,1>+18X<,2>-18X<,3>+18X<,4>-19.609;Y<,2>=9X<,1>-3.60×10<'-15>X<,2>+3.597×10<'-15>X<,3>-3.60×10<'-15>X<,4>