16615.大腸桿菌o157h7富集及快速檢測方法的研究

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌態(tài)堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫)：氟寄靶簽字日期：刃『2年多月7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完

2、全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(

3、保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名(手寫)：簽字日期：如臟年／月7能者不＼h’、，o導(dǎo)師簽名(手寫)：日簽字日期：勿f／2年石月∥日摘要摘要大腸桿菌0157：H7是腸出血性大腸桿菌(EHEC)的主要血清型，能夠?qū)е赂篂a、出血性結(jié)腸炎、溶血性尿毒綜合癥和血栓形成的血小板減少性紫癜等病癥，該菌的流行暴發(fā)大多與食用被該菌污染的食物有關(guān)，因此建立快速、簡單、靈敏度高和特異性強(qiáng)的檢測方法對(duì)于該菌的防控具有重要意義。本文建立了免疫

4、磁珠分離富集和膠體金免疫層析試紙條相結(jié)合的方法，用于大腸桿菌0157：H7的快速檢測。本研究以03％甲醛滅活的大腸桿菌0157：H7菌體作為免疫原制備了兩組兔多抗，間接ELISA測得純化后的效價(jià)分別為1／64x105和1／128x106；以酸洗脫法提取的鞭毛蛋白免疫Balb／c小鼠制備單抗，獲得了3株穩(wěn)定分泌特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株(10C5H3B6、8C2和881C2一B1)，其制備的腹水純化后效價(jià)分別為1／64x106、1／1

5、6x104和1／128x105，Westernblots結(jié)果顯示單抗10C5H3B6針對(duì)的抗原表位為菌體脂多糖(LPS)，單抗8C2針對(duì)的抗原表位為鞭毛蛋白。本研究采用EDC／NHSS化學(xué)偶聯(lián)法制備免疫磁珠，對(duì)免疫磁珠進(jìn)行了表征，按實(shí)際捕獲效果來確定免疫磁珠制備工藝，對(duì)免疫磁珠添加量、孵育時(shí)間、分離時(shí)間等進(jìn)行了優(yōu)化，評(píng)價(jià)了其特異性及在食品基質(zhì)樣品中的捕獲效果。結(jié)果顯示：單抗10C5H3B6免疫磁珠捕獲率為999％，偶聯(lián)時(shí)抗體加入量為50

6、gg／mg；經(jīng)試驗(yàn)優(yōu)化，確定在1mL體系中免疫磁珠加入量為005mg，室溫孵育時(shí)間為30min，磁分離時(shí)間為3min。該免疫磁珠特異性良好，在牛肉和牛奶基質(zhì)中的捕獲率分別為944％和998％，而商品化的Dynabeadsanti0157免疫磁珠在牛肉餡和牛奶基質(zhì)中的捕獲率分別為728％和958％。采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，膠體金標(biāo)記單抗10C5H3B6后噴于金標(biāo)墊上，NC膜上依次噴2號(hào)兔多抗和驢抗鼠多抗作為檢測線和質(zhì)控線，研制