以抗菌肽為生物識別元件快速檢測大腸桿菌O157-H7的比色傳感方法.pdf

1、食源性致病菌嚴重威脅人類身體健康，長期以來備受關(guān)注。檢測食源性致病菌的方法包括培養(yǎng)計數(shù)法、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和生物傳感方法等。抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)是一種新型生物識別元件，已應(yīng)用于檢測食源性致病菌的生物傳感器中。本文利用AMP在細菌表面豐富識別位點的優(yōu)勢，實現(xiàn)AMP的識別和信號放大的雙功能，構(gòu)建一系列快速、靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的比色傳感方法。主要內(nèi)容如下:
　　1、免疫磁分離

2、技術(shù)在分離大腸桿菌O157∶H7中的應(yīng)用
　　免疫磁分離技術(shù)能從食品樣本中特異性的分離富集食源性致病菌。本章對大腸桿菌O157∶H7的捕獲率高達90％。同時，本文利用磁分離-洗脫法，將磁珠表面捕獲到的細菌洗脫，回收率為85％。該方法有望降低磁珠的非特異性吸附，降低背景信號，為后續(xù)檢測方法開發(fā)奠定良好的基礎(chǔ)。
　　2、基于生物素-抗菌肽和生物素-辣根過氧化物酶競爭作用檢測大腸桿菌O157∶H7
　　本章通過偶聯(lián)生物素的A

3、MP(bio-AMP)和偶聯(lián)生物素的辣根過氧化物酶（bio-HRP）在鏈霉親和素磁珠(MNB-SA)表面的競爭反應(yīng)實現(xiàn)大腸桿菌O157∶H7的比色法檢測。實驗過程中，bio-AMP與大腸桿菌O157∶H7結(jié)合后通過離心作用隨之沉淀到底部，上清中bio-AMP的濃度反映大腸桿菌O157∶H7濃度。bio-AMP的濃度通過其與bio-HRP在MNB-SA表面通過競爭反應(yīng)體現(xiàn)。該方法的檢測范圍為103-106cfu/mL，檢測限為721cfu

4、/mL。
　　3、基于抗菌肽-辣根過氧化物酶的快速靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的比色分析法
　　為進一步提高靈敏度，本章利用辣根過氧化物酶(HRP)修飾的AMP構(gòu)建快速靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的光學(xué)傳感平臺。AMP-HRP與大腸桿菌O157∶H7快速結(jié)合，未結(jié)合的AMP-HRP被過濾除去，加入HRP的底物后留在濾膜上的細菌-AMP-HRP催化產(chǎn)生藍色。細菌濃度越高，藍色越深;反之，則較淺甚至無色。在純菌液中檢測限低至

5、13cfu/mL。經(jīng)過免疫磁分離-洗脫之后，特異性得到顯著提高。該方法在蘋果汁和碎牛肉樣本中檢測限分別為119和451cfu/mL，說明該方法在食源性致病菌檢測方面具有一定的應(yīng)用價值和推廣意義。
　　4、抗菌肽修飾的磁顆粒和免標(biāo)記脲酶信號放大系統(tǒng)快速檢測大腸桿菌O157∶H7
　　為簡化操作，本章合成雙功能的AMP修飾的磁顆粒，以脲酶為信號放大分子，建立快速、便捷和靈敏的檢測大腸桿菌O157∶H7的新型比色法。AMP修飾的磁