以抗菌肽為生物識別元件快速檢測大腸桿菌O157-H7的比色傳感方法.pdf

1、食源性致病菌嚴重威脅人類身體健康，長期以來備受關注。檢測食源性致病菌的方法包括培養(yǎng)計數(shù)法、免疫學方法、分子生物學方法和生物傳感方法等。抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)是一種新型生物識別元件，已應用于檢測食源性致病菌的生物傳感器中。本文利用AMP在細菌表面豐富識別位點的優(yōu)勢，實現(xiàn)AMP的識別和信號放大的雙功能，構建一系列快速、靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的比色傳感方法。主要內容如下:
　　1、免疫磁分離

2、技術在分離大腸桿菌O157∶H7中的應用
　　免疫磁分離技術能從食品樣本中特異性的分離富集食源性致病菌。本章對大腸桿菌O157∶H7的捕獲率高達90％。同時，本文利用磁分離-洗脫法，將磁珠表面捕獲到的細菌洗脫，回收率為85％。該方法有望降低磁珠的非特異性吸附，降低背景信號，為后續(xù)檢測方法開發(fā)奠定良好的基礎。
　　2、基于生物素-抗菌肽和生物素-辣根過氧化物酶競爭作用檢測大腸桿菌O157∶H7
　　本章通過偶聯(lián)生物素的A

3、MP(bio-AMP)和偶聯(lián)生物素的辣根過氧化物酶（bio-HRP）在鏈霉親和素磁珠(MNB-SA)表面的競爭反應實現(xiàn)大腸桿菌O157∶H7的比色法檢測。實驗過程中，bio-AMP與大腸桿菌O157∶H7結合后通過離心作用隨之沉淀到底部，上清中bio-AMP的濃度反映大腸桿菌O157∶H7濃度。bio-AMP的濃度通過其與bio-HRP在MNB-SA表面通過競爭反應體現(xiàn)。該方法的檢測范圍為103-106cfu/mL，檢測限為721cfu

4、/mL。
　　3、基于抗菌肽-辣根過氧化物酶的快速靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的比色分析法
　　為進一步提高靈敏度，本章利用辣根過氧化物酶(HRP)修飾的AMP構建快速靈敏檢測大腸桿菌O157∶H7的光學傳感平臺。AMP-HRP與大腸桿菌O157∶H7快速結合，未結合的AMP-HRP被過濾除去，加入HRP的底物后留在濾膜上的細菌-AMP-HRP催化產(chǎn)生藍色。細菌濃度越高，藍色越深;反之，則較淺甚至無色。在純菌液中檢測限低至

5、13cfu/mL。經(jīng)過免疫磁分離-洗脫之后，特異性得到顯著提高。該方法在蘋果汁和碎牛肉樣本中檢測限分別為119和451cfu/mL，說明該方法在食源性致病菌檢測方面具有一定的應用價值和推廣意義。
　　4、抗菌肽修飾的磁顆粒和免標記脲酶信號放大系統(tǒng)快速檢測大腸桿菌O157∶H7
　　為簡化操作，本章合成雙功能的AMP修飾的磁顆粒，以脲酶為信號放大分子，建立快速、便捷和靈敏的檢測大腸桿菌O157∶H7的新型比色法。AMP修飾的磁