以抗菌肽為生物識(shí)別元件快速檢測(cè)大腸桿菌O157-H7的比色傳感方法.pdf

1、食源性致病菌嚴(yán)重威脅人類身體健康，長(zhǎng)期以來(lái)備受關(guān)注。檢測(cè)食源性致病菌的方法包括培養(yǎng)計(jì)數(shù)法、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和生物傳感方法等?？咕?antimicrobial peptide，AMP)是一種新型生物識(shí)別元件，已應(yīng)用于檢測(cè)食源性致病菌的生物傳感器中。本文利用AMP在細(xì)菌表面豐富識(shí)別位點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)AMP的識(shí)別和信號(hào)放大的雙功能，構(gòu)建一系列快速、靈敏檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7的比色傳感方法。主要內(nèi)容如下:
　　1、免疫磁分離

2、技術(shù)在分離大腸桿菌O157∶H7中的應(yīng)用
　　免疫磁分離技術(shù)能從食品樣本中特異性的分離富集食源性致病菌。本章對(duì)大腸桿菌O157∶H7的捕獲率高達(dá)90％。同時(shí)，本文利用磁分離-洗脫法，將磁珠表面捕獲到的細(xì)菌洗脫，回收率為85％。該方法有望降低磁珠的非特異性吸附，降低背景信號(hào)，為后續(xù)檢測(cè)方法開發(fā)奠定良好的基礎(chǔ)。
　　2、基于生物素-抗菌肽和生物素-辣根過氧化物酶競(jìng)爭(zhēng)作用檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7
　　本章通過偶聯(lián)生物素的A

3、MP(bio-AMP)和偶聯(lián)生物素的辣根過氧化物酶（bio-HRP）在鏈霉親和素磁珠(MNB-SA)表面的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)大腸桿菌O157∶H7的比色法檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)過程中，bio-AMP與大腸桿菌O157∶H7結(jié)合后通過離心作用隨之沉淀到底部，上清中bio-AMP的濃度反映大腸桿菌O157∶H7濃度。bio-AMP的濃度通過其與bio-HRP在MNB-SA表面通過競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)體現(xiàn)。該方法的檢測(cè)范圍為103-106cfu/mL，檢測(cè)限為721cfu

4、/mL。
　　3、基于抗菌肽-辣根過氧化物酶的快速靈敏檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7的比色分析法
　　為進(jìn)一步提高靈敏度，本章利用辣根過氧化物酶(HRP)修飾的AMP構(gòu)建快速靈敏檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7的光學(xué)傳感平臺(tái)。AMP-HRP與大腸桿菌O157∶H7快速結(jié)合，未結(jié)合的AMP-HRP被過濾除去，加入HRP的底物后留在濾膜上的細(xì)菌-AMP-HRP催化產(chǎn)生藍(lán)色。細(xì)菌濃度越高，藍(lán)色越深;反之，則較淺甚至無(wú)色。在純菌液中檢測(cè)限低至

5、13cfu/mL。經(jīng)過免疫磁分離-洗脫之后，特異性得到顯著提高。該方法在蘋果汁和碎牛肉樣本中檢測(cè)限分別為119和451cfu/mL，說(shuō)明該方法在食源性致病菌檢測(cè)方面具有一定的應(yīng)用價(jià)值和推廣意義。
　　4、抗菌肽修飾的磁顆粒和免標(biāo)記脲酶信號(hào)放大系統(tǒng)快速檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7
　　為簡(jiǎn)化操作，本章合成雙功能的AMP修飾的磁顆粒，以脲酶為信號(hào)放大分子，建立快速、便捷和靈敏的檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7的新型比色法。AMP修飾的磁