稻瘟病菌無毒基因AVR-Pii物理圖譜的構(gòu)建.pdf

1、中文摘要由子囊菌6lagnaporthegrisea引起的稻瘟病是世界性的水稻病害之一，危害嚴(yán)重。防治該病的有效措施是栽培抗病品種，但更重要的方面是要廣泛分析我國現(xiàn)有水稻品種的抗瘟基因型、了解田間菌群中無毒基因的種類、數(shù)量和分布并及時(shí)監(jiān)測其變化.這將有助于了解病原菌小種的變異機(jī)理:有利于建立稻瘟病菌小種快速鑒定的分子技術(shù)，在實(shí)踐上用于指導(dǎo)抗病品種的合理布局和輪換，以更有效地控制病害的發(fā)生。木研究在張國珍博士獲得與無毒基因AVRPii連鎖

2、的兩個(gè)RAPD標(biāo)記(并轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記):OP107o。和OPMIO134的基礎(chǔ)上進(jìn)行染色體步移，旨在克隆AVRPii無毒基因。首先，采用PCR的方法對兩個(gè)SCAR標(biāo)記進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)在SCAR標(biāo)記OPMI。二。處菌株P(guān)131與Y34存在差異不過，在SCAR標(biāo)記OPI07o。處菌株P(guān)131與Y34不存在差異。用標(biāo)記OPM10131的SCAR引物在菌株P(guān)131與Y34中分別擴(kuò)增出了1314bp與1664bp的兩條不同長度的。NA片段，測序后

3、發(fā)現(xiàn)后者是在】314bp中插入了一段350bp的重復(fù)序列?；蚪MSouthem雜交及數(shù)據(jù)庫BLAST表明:標(biāo)記OP107700在P131與Y34基因組是單拷貝的，SCAR標(biāo)記OPMIO1314的1314bp中有重復(fù)序列。對兩個(gè)SCAR標(biāo)記和AVRPii基因在染色體上的定位分析表明它們位于稻瘟病菌基因組第”號染色體的端粒附近位置。其中無毒基因AVRP“較兩個(gè)標(biāo)記更靠近端粒，同時(shí)它們都在supercontig川上(supercontig川上

4、一共有154個(gè)contigs，從Contig2.513到Contig2.360)，其中Contig2.360是在端粒位置SCAR標(biāo)記OPM10131被定位在Contig2.387上，OP107700被定位在Contig2.381上。通過兩個(gè)標(biāo)記相向進(jìn)行染色體步移，構(gòu)建了兩個(gè)SCAR標(biāo)記區(qū)域的物理圖譜，由3個(gè)含有最小重疊的TAC克隆覆蓋了兩個(gè)標(biāo)記區(qū)域，分析兩個(gè)標(biāo)記間的物理距離大約為90Kb，根據(jù)兩個(gè)標(biāo)記間的遺傳距離為3.16cM，可以推算

5、出在該區(qū)域一個(gè)遺傳單位相當(dāng)于28Kb的物理距離。比Farman等發(fā)現(xiàn)的一個(gè)遺傳單位相當(dāng)于50Kb的物理距離要小:比Zhu等發(fā)現(xiàn)的一個(gè)遺傳單位相當(dāng)于41Kb的物理距離也小，而與AVRICO39區(qū)域一個(gè)cm對應(yīng)33.5Kb的物理距離相近。推測可能是由于該區(qū)域在染色體端粒的位置，重組事件發(fā)生的多的緣故。同時(shí)也可以知道近的SCAR標(biāo)記OP107700到目的基因的距離約是186Kb在此基礎(chǔ)上向目的基因進(jìn)行染色體步移，用4個(gè)含有最小重疊的TAC克隆

6、向目的基因前進(jìn)了約210Kb，由遺傳圖譜與物理圖譜的對應(yīng)關(guān)系知道已經(jīng)覆蓋了無毒基因AVRPii區(qū)域。這些工作為無毒基因AVRPii的克隆莫定了基礎(chǔ).關(guān)鍵詞:稻瘟病菌Magnaporihegrisea無毒基因物理圖譜遺傳圖譜獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)

7、位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:.i時(shí)間:一。切年乙月。。日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即:學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)