稻瘟病菌MgATG9基因的克隆與功能分析.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)能引起水稻上的一種重要病害-稻瘟病，了解其致病過(guò)程和機(jī)理對(duì)于防治稻瘟病菌有重要作用。近年研究表明細(xì)胞自噬可能參與了稻瘟病菌侵染水稻過(guò)程中分生孢子體死亡的過(guò)程。細(xì)胞自噬是細(xì)胞中一種物質(zhì)降解方式，在一些特定情況下，自噬被誘導(dǎo)，一些長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和細(xì)胞器被運(yùn)送到液泡/溶酶體中被降解，從而能量和物質(zhì)得以重新利用。此過(guò)程在許多生物體中是保守的，一些參與過(guò)程的基因也是保守的。稻瘟病菌中存在與啤酒酵母自噬相

2、關(guān)基因，ScATG1和，ScATG8同源的兩個(gè)基因MgATG1和MgATG8，它們的缺失突變子表型與野生型存在很大差異。本文則分離和克隆了，ScATG9在稻瘟病菌中的同源基因MgATG9，通過(guò)基因敲除的方法初步分析了MgATG9在致病及相關(guān)過(guò)程中的作用。研究結(jié)果如下： 1.利用ScATG9基因預(yù)測(cè)的氨基酸序列在稻瘟病菌基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索序列相似的基因，定名為MgATG9。 2.PCR擴(kuò)增獲得cDNA克隆。測(cè)序分析CDS長(zhǎng)

3、2754nt，編碼918aa。 3.構(gòu)建MgATG9基因置換載體，得到基因MgATG9缺失突變體△mgatg9。 4.基因MgATG9缺失后，細(xì)胞自噬過(guò)程中斷，在液泡中未見(jiàn)自噬泡的積累。 5.突變子在CM培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)菌絲稀疏，產(chǎn)孢量顯著下降。 6.突變子分生孢子發(fā)育受到影響。 7.突變子附著胞膨壓顯著下降。 8.突變子致病性幾乎完全喪失，在水稻和大麥葉片上不能形成可見(jiàn)病斑;在有傷口的大麥