家蠶卵黃和胚胎蛋白質(zhì)組及其催青期變動(dòng)的研究.pdf

1、浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院博士學(xué)位論文家蠶卵黃和胚胎蛋白質(zhì)組及其催青期變動(dòng)的研究姓名：顏新培申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：徐孟奎;鐘伯雄20040501窒重塑墮塑壁墮堡魚(yú)墮望墨莖壁童塑壅墊墮塹塞中文摘要胚胎發(fā)育一直是生命科學(xué)研究的主題之一。家蠶是重要的模式實(shí)驗(yàn)昆蟲(chóng)，從一個(gè)受精卵發(fā)育成一個(gè)多細(xì)胞的個(gè)體，是許多基因在時(shí)間和空間上順序表達(dá)的結(jié)果。家蠶在催青期按預(yù)定區(qū)域分化形成頭、胸、腹及幼蟲(chóng)各種組織器官，但引起這些形態(tài)特征變化的

2、基網(wǎng)功能并未解明。在后基因時(shí)代，功能基因組學(xué)成為研究的重點(diǎn)，蛋白質(zhì)組是研究基因功能的重要方法，在目前家蠶胚胎發(fā)育機(jī)理尚未闡明的情況下，有必要開(kāi)展家蠶催青期胚胎蛋白質(zhì)組研究。本研究采劇l 削相化p H 梯度( i m m o b i l i z e dp Hg r a d i e n tI P G ) 雙向電泳分離技術(shù)和生物質(zhì)譜分析等鑒定技術(shù)，結(jié)合蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索系統(tǒng)，進(jìn)行家蠶催青期功能蛋白質(zhì)組的研究。探索家蠶成熟卵中卵黃蛋白的組成和在催

3、青期胚胎發(fā)育過(guò)程中的代謝變化：建立催青期各個(gè)發(fā)育階段胚胎蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，比較各個(gè)胚胎之間的特異蛋白斑點(diǎn)，并進(jìn)一步闡明有關(guān)蛋白質(zhì)的功能。本研究首先從整體水平研究了家蠶成熟卵中卵黃蛋白的構(gòu)成，從分子水平揭示家蠶卵黃蛋白在催青期胚胎發(fā)育中的變化。通過(guò)對(duì)家蠶成熟卵中卵黃蛋白雙向電泳圖譜的比較分析，發(fā)現(xiàn)家蠶卵黃蛋白凝膠圖像中能檢測(cè)到2 0 0 個(gè)左右蛋白斑點(diǎn)( 前人研究報(bào)道有三類卵黃蛋白) 。在本研究中卵黃磷蛋白( v i t e l l i

4、 n ，V n ) 、3 0 k D 蛋白和卵特異蛋白( E g gs p e c i f i cp r o t e i n ，E S P ) 二類高豐度蛋白占卵黃蛋白總量的6 5 ．5 ％，并且在分子質(zhì)量標(biāo)記為3 0 k D 區(qū)域有許多蛋白斑點(diǎn)，可能3 0 k D 存在著極為相似的多基因家族。對(duì)應(yīng)于卵黃磷蛋白的4 2 k D 亞基的區(qū)域有1 0 個(gè)高含量蛋白連在一起，這種現(xiàn)象的產(chǎn)生可能是蛋白質(zhì)后加工的不同或試樣調(diào)制時(shí)的影響，也可能是家

5、蠶體內(nèi)本身存在著極為相似的多基因家族。對(duì)多化性品種P 5 0 和二化性品種豐1 處女蛾卵的卵黃蛋白進(jìn)行了品種間比較。P 5 0 和豐1 處女蛾卵的卵黃蛋白經(jīng)雙向電泳分離和銀染后，能夠檢測(cè)得到的蛋白斑點(diǎn)數(shù)分別為2 0 3 個(gè)和1 8 5 個(gè)．蛋白斑點(diǎn)匹配率為7 7 ．8 4 ％。卵黃磷蛋白、3 0 k D蛋白和卵特異蛋白三類高豐度蛋白含量也不相同。說(shuō)明不同品種之問(wèn)卵黃蛋白質(zhì)存在著差異，暗示家蠶卵黃蛋白含量和種類與品種的化性、眠性、地理系統(tǒng)