23039.草魚促性腺激素基因原核表達及多克隆抗體的制備

1、分學研究生姓名塞!j墮指導(dǎo)教師姓名、職稱奎建主：割塾撞學科專業(yè)盈塹堂研究方向邈塹生墨堂湖南師范大學學位評定委員會辦公室二零一一年四月摘要IIIIIIIIIIIlllIllIIIY1911910促性腺激素(GonadotropinHormone，GTH)是由脊椎動物垂體(PituitaryGland，PG)前葉細胞合成與分泌的一類糖蛋白激素(GlycoproteinHormones，GPHs)，主要生理作用是刺激生殖細胞的生長、發(fā)育、成熟

2、、排精及排卵。魚類存在兩種類型的GTHs，即GTHI和GTHII，分別對應(yīng)于哺乳類的促卵泡素(FollicleStimulatingHormone，F(xiàn)SH)矛I促黃體生成素(LuteinizingHormone，LH)，GTH是一個二聚體分子，由共同的含抗原決定因素的n亞基和激素生物學特異性的p亞基組成，兩個亞基只有結(jié)合在一起才能發(fā)揮激素的生物學活性。魚類的生殖周期主要由下丘腦垂體性腺軸調(diào)控，而垂體分泌的促性腺激素在魚類的生殖周期調(diào)控中

3、占據(jù)中心地位，是促進性腺發(fā)育與成熟的關(guān)鍵性激素。本研究選用草魚(Grasscarp，Ctenopharyngodonidella)作為實驗材料，從草魚腦垂體中提取總RNA，設(shè)計合成三對草魚促性腺激素基因(GTHcx、FSH]3和LHl3)的特異性引物，RTPCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)克隆得到編碼草魚促性腺激素基因的cDNA序列，它們的開放閱讀框全長分別為357bp，39

4、3bp和441bp，分別編碼118，130和146個氨基酸。選用原核表達載體pGEX4T1，分別插入草魚GTHct、FSHp年ILHl3的ORF序列，構(gòu)建成N端含有GST融合蛋白標簽的表達質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達菌株BL21(DE3)，在IPTG(異丙基pD硫代半乳糖苷)誘導(dǎo)下表達出3個融合蛋白，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示重組融合蛋白GSTGTHot、GSTFSHl3和GSTLHl3的表觀分子量大約為35kDa、38kDa和391(