小鼠β-防御素-9的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備.pdf

1、β-防御素是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有數(shù)十個(gè)氨基酸組成的陽(yáng)離子小肽，具有廣譜抗微生物活性。本論文使用基因工程方法重組表達(dá)可溶性小鼠β-防御素-9。采用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)，建立了從獲得基因、載體構(gòu)建到表達(dá)優(yōu)化及放大，直至產(chǎn)物分離、多克隆抗體制備整套技術(shù)體系。主要的方法與研究結(jié)果如下：
　　 1.本文利用進(jìn)行了密碼子優(yōu)化的β-防御素-9表達(dá)菌種BL21（DE3）/pET-32a（+）-rDefb9，考慮誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)劑量、誘導(dǎo)時(shí)機(jī)、表達(dá)時(shí)機(jī)

2、等因素，進(jìn)行搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化。獲得優(yōu)化培養(yǎng)條件為：誘導(dǎo)溫度為28℃，IPTG量為0.8 mmol·L-1，誘導(dǎo)時(shí)機(jī)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期，誘導(dǎo)后表達(dá)3h終止。
　　 2.對(duì)所得重組小鼠β-防御素-9（rDefb9）的分離工藝進(jìn)行了探索，經(jīng)過(guò)了Ni離子親和層析，甲酸裂解融合蛋白等一系列處理，得到了純度較高的成熟的重組rDefb-9。
　　 3.采用純化的原核表達(dá)重組蛋白免疫家兔，制備rDefb-9的多克隆抗體，然后以酶聯(lián)免疫吸附