土撥鼠CTLA4 的原核表達和多克隆抗體的制備.pdf

1、研究背景：土撥鼠肝炎病毒（WHV）屬于嗜肝DNA病毒，與人乙型肝炎病毒（HBV）關系十分密切，在基因組結構、病毒復制和病毒感染過程等方面都十分的相類似[1,2,3]，是目前已知的用于研究乙肝病毒的致病機制和篩選新的抗病毒藥物，并且在研制新的疫苗中發(fā)揮重要作用的最理想小動物模型。目前各國學者對乙型肝炎病毒難以清除，如果機體缺乏有效的T細胞免疫會最終導致慢性化這一點是持一致和肯定意見的。注重于探討抗病毒反應引起T細胞活化的相關因素在以往的研

2、究中多有涉及，但是卻忽略了一個目前已經(jīng)逐漸認識到了的重要問題：負調(diào)節(jié)機制在抑制T細胞活化方面同樣發(fā)揮重要作用。近年來的許多研究表明乙肝感染程度除了與免疫反應的強度有關之外，它同時又是一個被許多細胞因子相互調(diào)節(jié)的過程，這其中就包括細胞表面的受體CTLA4 [4]。在本研究中，通過分子克隆的手段成功將CTLA4構建到原核表達載體中并在大腸桿菌BL21（DE3）進行誘導表達，并最終制備了多克隆抗體。這一實驗結果為進一步完善土撥鼠模型相關指標，

3、檢測和研究CTLA4在正常、急性、慢性WHV中的表達，評估CTLA4在肝炎慢性化中的作用奠定一定的基礎。
　　 目的：⑴構建土撥鼠CTLA4的原核表達載體并在大腸桿菌中進行表達。⑵制備了多克隆抗體，同時檢測土撥鼠CTLA4的特異性和靈敏性。
　　 方法：①應用基因工程技術將土撥鼠的CTLA4的基因片段裝入原核表達載體，轉化表達菌后誘導目的蛋白的表達，應用電洗脫方法純化目的蛋白，并用SDS-PAGE和Western blo