土撥鼠CTLA4 的原核表達(dá)和多克隆抗體的制備.pdf

1、研究背景：土撥鼠肝炎病毒（WHV）屬于嗜肝DNA病毒，與人乙型肝炎病毒（HBV）關(guān)系十分密切，在基因組結(jié)構(gòu)、病毒復(fù)制和病毒感染過程等方面都十分的相類似[1,2,3]，是目前已知的用于研究乙肝病毒的致病機(jī)制和篩選新的抗病毒藥物，并且在研制新的疫苗中發(fā)揮重要作用的最理想小動物模型。目前各國學(xué)者對乙型肝炎病毒難以清除，如果機(jī)體缺乏有效的T細(xì)胞免疫會最終導(dǎo)致慢性化這一點(diǎn)是持一致和肯定意見的。注重于探討抗病毒反應(yīng)引起T細(xì)胞活化的相關(guān)因素在以往的研

2、究中多有涉及，但是卻忽略了一個目前已經(jīng)逐漸認(rèn)識到了的重要問題：負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制在抑制T細(xì)胞活化方面同樣發(fā)揮重要作用。近年來的許多研究表明乙肝感染程度除了與免疫反應(yīng)的強(qiáng)度有關(guān)之外，它同時又是一個被許多細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié)的過程，這其中就包括細(xì)胞表面的受體CTLA4 [4]。在本研究中，通過分子克隆的手段成功將CTLA4構(gòu)建到原核表達(dá)載體中并在大腸桿菌BL21（DE3）進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并最終制備了多克隆抗體。這一實驗結(jié)果為進(jìn)一步完善土撥鼠模型相關(guān)指標(biāo)，

3、檢測和研究CTLA4在正常、急性、慢性WHV中的表達(dá)，評估CTLA4在肝炎慢性化中的作用奠定一定的基礎(chǔ)。
　　 目的：⑴構(gòu)建土撥鼠CTLA4的原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。⑵制備了多克隆抗體，同時檢測土撥鼠CTLA4的特異性和靈敏性。
　　 方法：①應(yīng)用基因工程技術(shù)將土撥鼠的CTLA4的基因片段裝入原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化表達(dá)菌后誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)，應(yīng)用電洗脫方法純化目的蛋白，并用SDS-PAGE和Western blo