24426.限制修飾缺失大腸桿菌的構建及其在微生物次級代謝研究中的應用

1、申請上海交通大學碩士學位論文限制修飾缺失大腸桿菌的構建限制修飾缺失大腸桿菌的構建及其在微生物次級代謝研究中的應用及其在微生物次級代謝研究中的應用作者姓名：周豪導師：鄧子新學科專業(yè)：微生物學所在院系：生命科學技術學院資助項目：農(nóng)藥微生物功能基因組（863項目）上海交通大學二零一一年五月上海交通大學碩士學位論文限制修飾缺失大腸桿菌的構建限制修飾缺失大腸桿菌的構建及其在微生物次級代謝研究中的應用及其在微生物次級代謝研究中的應用摘要放線菌是重要

2、的抗生素產(chǎn)生菌?？股氐却渭壌x的研究需要借助大腸桿菌菌株進行基因克隆，并通過特殊菌株介導屬間接合轉(zhuǎn)移以便開展基因中斷或基因簇異源表達等研究。目前沒有同時兼?zhèn)渖鲜龉δ艿拇竽c桿菌菌株。本研究在廣泛使用的大腸桿菌克隆宿主DH10B的基礎上，依次敲除了甲基化基因dcm和dam，得到DNA甲基化缺陷的非限制型大腸桿菌JTU006(Dcm)和JTU007(DamDcm)；探索了這些菌株在大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、接合轉(zhuǎn)移和基因組文庫構建及克隆次級代謝功能基因等

3、研究中的應用。將帶有39kb放線紫紅素生物合成基因簇的質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移到變鉛青鏈霉菌、天藍色鏈霉菌、阿維鏈霉菌、棒狀鏈霉菌和紅色糖多孢菌中，比較上述3種大腸桿菌菌株和ET12567介導接合轉(zhuǎn)移的效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的放線菌對甲基化差異的不同供體菌具有不同的優(yōu)先次序：（1）變鉛青鏈霉菌和阿維鏈霉菌以同等效率接受4種供體的接合轉(zhuǎn)移；（2）天藍色鏈霉菌優(yōu)先接受DamDcm供體菌的接合轉(zhuǎn)移，其次是DamDcm菌株，DamDcm供體效率最低；（3）對于