南海五種常見石斑魚的RFLP和SSCP研究.pdf

1、本文使用RFLP技術分析了南海海域石斑魚屬野生蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚的種內和種間遺傳多樣性、種間親緣關系和系統(tǒng)分化，構建了這五種魚的酶切物理圖譜，并建立了識別它們的分子遺傳標記。 用差速離心法從蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚五種魚的新鮮肝組織中提取線粒體DNA。純化后的mtDNA用識別5、6堿基序列的17種限制性內切酶，即BamH I，Bgl I，Bgl II，Dra

2、I，EcoR I，EcoR V，Hind III， Kpn I，Mlu I，Pst I，Pvu II，Sal I，Sca I，Sma I，Sty I，Xba I和Xho I進行單酶切和雙酶切，用凝膠成像分析系統(tǒng)檢測。根據各酶切片段的長度，測算出蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚的mtDNA分子大小分別為18.52±0.21kb、18.44±0.21 kb、18.56±0.18 kb、18.57±0.19 kb和

3、18.36±0.11 kb。 采用基因多樣性指數（h）、酶切類型間平均遺傳距離（P）和核苷酸多樣性指數（π）等指標對群體內的遺傳多樣性進行了描述。在蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚群體內分別檢出了8種、5種、8種、5種和2種酶切類型，基因多樣性指數（h）分別為：0.8943、0.6186、0.9242、0.6927和0.1820；酶切類型間平均遺傳距離（P）分別為：0.62±0.31％、0.64±0.37

4、％、1.12±0.55％、0.72±0.42％和0.45％；核苷酸多樣性指數（π）分別為：0.22％、0.13％、0.46％、0.17％和0.04％。這些結果說明湛江沿海野生石斑魚的遺傳變異水平較高，遺傳多樣性比較豐富。 蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚種間研究的結果是：種間凈遺傳距離（Pnet）分別為：0.0694（蜂巢-鮭點）、0.1337（蜂巢-青石斑）、0.1090（蜂巢-赤點）、0.1286（蜂

5、巢-七帶）、0.1590（鮭點-青石斑）、0.0825（鮭點-赤點）、0.1153（鮭點-七帶）、0.1131（青石斑-赤點）、0.0724（青石斑-七帶）和0.1336（赤點-七帶）。用NJ法和UPGMA法對這五種石斑魚進行聚類分析，兩種方法得出的分子聚類圖具有相同的拓撲結構。從結果可知，蜂巢石斑魚和鮭點石斑魚首先聚在一起，然后和赤點石斑魚聚類，最后再與青石斑魚和七帶石斑魚相聚。 通過單、雙酶切分析，分別構建了蜂巢石斑魚10種

6、酶共20個酶切位點、鮭點石斑魚9種酶共17個酶切位點、青石斑魚8種酶共16個酶切位點、赤點石斑魚7種酶共12個酶切位點和七帶石斑魚8種酶共13個酶切位點的酶切物理圖譜。 BglⅡ和XhoⅠ兩種內切酶的酶切帶型可作為鑒別這五種石斑魚的分子遺傳標記。 此外，本文還使用PCR-SSCP技術對這五種石斑魚進行了初步分析。使用通用引物L14841和H15149在這五種石斑魚的總DNA中均擴增出mtDNA Cyt-b基因編碼區(qū)中大小