南海五種常見石斑魚的RFLP和SSCP研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文使用RFLP技術分析了南海海域石斑魚屬野生蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚的種內和種間遺傳多樣性、種間親緣關系和系統(tǒng)分化,構建了這五種魚的酶切物理圖譜,并建立了識別它們的分子遺傳標記。 用差速離心法從蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚五種魚的新鮮肝組織中提取線粒體DNA。純化后的mtDNA用識別5、6堿基序列的17種限制性內切酶,即BamH I,Bgl I,Bgl II,Dra

2、I,EcoR I,EcoR V,Hind III, Kpn I,Mlu I,Pst I,Pvu II,Sal I,Sca I,Sma I,Sty I,Xba I和Xho I進行單酶切和雙酶切,用凝膠成像分析系統(tǒng)檢測。根據各酶切片段的長度,測算出蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚的mtDNA分子大小分別為18.52±0.21kb、18.44±0.21 kb、18.56±0.18 kb、18.57±0.19 kb和

3、18.36±0.11 kb。 采用基因多樣性指數(h)、酶切類型間平均遺傳距離(P)和核苷酸多樣性指數(π)等指標對群體內的遺傳多樣性進行了描述。在蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚群體內分別檢出了8種、5種、8種、5種和2種酶切類型,基因多樣性指數(h)分別為:0.8943、0.6186、0.9242、0.6927和0.1820;酶切類型間平均遺傳距離(P)分別為:0.62±0.31%、0.64±0.37

4、%、1.12±0.55%、0.72±0.42%和0.45%;核苷酸多樣性指數(π)分別為:0.22%、0.13%、0.46%、0.17%和0.04%。這些結果說明湛江沿海野生石斑魚的遺傳變異水平較高,遺傳多樣性比較豐富。 蜂巢石斑魚、鮭點石斑魚、青石斑魚、赤點石斑魚和七帶石斑魚種間研究的結果是:種間凈遺傳距離(Pnet)分別為:0.0694(蜂巢-鮭點)、0.1337(蜂巢-青石斑)、0.1090(蜂巢-赤點)、0.1286(蜂

5、巢-七帶)、0.1590(鮭點-青石斑)、0.0825(鮭點-赤點)、0.1153(鮭點-七帶)、0.1131(青石斑-赤點)、0.0724(青石斑-七帶)和0.1336(赤點-七帶)。用NJ法和UPGMA法對這五種石斑魚進行聚類分析,兩種方法得出的分子聚類圖具有相同的拓撲結構。從結果可知,蜂巢石斑魚和鮭點石斑魚首先聚在一起,然后和赤點石斑魚聚類,最后再與青石斑魚和七帶石斑魚相聚。 通過單、雙酶切分析,分別構建了蜂巢石斑魚10種

6、酶共20個酶切位點、鮭點石斑魚9種酶共17個酶切位點、青石斑魚8種酶共16個酶切位點、赤點石斑魚7種酶共12個酶切位點和七帶石斑魚8種酶共13個酶切位點的酶切物理圖譜。 BglⅡ和XhoⅠ兩種內切酶的酶切帶型可作為鑒別這五種石斑魚的分子遺傳標記。 此外,本文還使用PCR-SSCP技術對這五種石斑魚進行了初步分析。使用通用引物L14841和H15149在這五種石斑魚的總DNA中均擴增出mtDNA Cyt-b基因編碼區(qū)中大小

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