馬鈴薯類病毒（PSTVd）分子鑒定及中國分離株系的克隆與序列分析.pdf

1、對(duì)采自中國東北佳木斯、大慶等地區(qū)具有典型馬鈴薯紡錘塊莖類病毒(PSTVd)癥狀的薯塊樣品進(jìn)行往返電泳(R-PAGE),確定含馬鈴薯紡錘塊莖類病毒的陽性樣品.利用R-PAGE進(jìn)行PSTVd檢測(cè),靈敏度可達(dá)到13ng.同時(shí),利用雙向電泳和RT-PCR方法進(jìn)行類病毒鑒定,證明兩種方法均可用來檢測(cè)類病毒.利用含PSTVd單體的pGEM-7Z質(zhì)粒,通過PCR擴(kuò)增技術(shù),用生物素標(biāo)記制備cDNA探針,進(jìn)行雜交反應(yīng)檢測(cè)PSTVd,其中通過化學(xué)顏色反應(yīng)進(jìn)

2、行判讀靈敏度可達(dá)到50pg,而用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行判讀靈敏度可達(dá)到5pg,分別是R-PAGE檢測(cè)靈敏度的260倍和26倍.且兩種反應(yīng)特異性和?；暂^強(qiáng).cDNA核酸斑點(diǎn)雜交反應(yīng)(NASH)檢測(cè)PSTVd方法準(zhǔn)確、靈敏度高,一次檢測(cè)樣品數(shù)量多,且對(duì)于異地樣品檢測(cè)非常方便,是以往其它檢測(cè)方法的有效補(bǔ)充.該研究對(duì)馬鈴薯類病毒(PSTVd)病原鑒定方法進(jìn)行系統(tǒng)研究,并制備出?；院吞禺愋詮?qiáng)、靈敏度高的cDNA探針,建立了完整的PSTVd鑒定體系和