馬鈴薯紡錘塊莖類病毒內(nèi)蒙古分離株基因序列分析及侵染性克隆的構(gòu)建.pdf

1、馬鈴薯紡錘塊莖類病毒（potato spindle tuber viroid，PSTVd）是近幾年影響馬鈴薯生產(chǎn)的重要病原之一，其對馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì)具有嚴重的影響，導(dǎo)致馬鈴薯品種種性退化和品質(zhì)下降。感染后馬鈴薯一般減產(chǎn)30％左右，嚴重的能高達90%。PSTVd具有極高的侵染性，可通過農(nóng)機具、切刀、種薯切塊摩擦等方式進行汁液傳播，也可通過介體昆蟲、花粉、種子、塊莖、水等方式傳播。PSTVd能在馬鈴薯的任何生育時期進行侵染，并表現(xiàn)多種癥狀

2、。
　　本研究以從內(nèi)蒙古采集到的受 PSTVd侵染的病薯為材料，克隆了PSTVd的全長基因，命名為內(nèi)蒙古分離株（potato spindle tuber viroid-Inner Mongolia，PSTVd-IM），對其序列進行了分析，構(gòu)建了PSTVd-IM侵染性克隆，主要取得的研究結(jié)果如下：
　　1.獲得了PSTVd-IM全長基因，并對其進行了測序的分析。測序結(jié)果表明，該序列大小為359bp，其與株系 EF044305.

3、1序列吻合，同源性高達100%。首次報道了我國PSTVd-IM內(nèi)蒙古分離株。將此內(nèi)蒙古分離株序列與已公布的128個全長的PSTVd株系，應(yīng)用 Mega5.1軟件構(gòu)建了系統(tǒng)進化樹，確定了該分離物與國內(nèi)外該類病毒分離物的親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)該分離物與俄羅斯分離物親緣關(guān)系最近。與已發(fā)表的PSTVd強株系（U23058.1）、中間株系（AY937179.1）和弱株系（M14814.1）進行了序列比對和二級結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn) PSTVd-IM與這三個不同致

4、病性株系在中央保守區(qū)、致病區(qū)和可變區(qū)結(jié)構(gòu)域存在差異，說明這些結(jié)構(gòu)域可能與其致病性相關(guān)。
　　2.構(gòu)建了PSTVd-IM的侵染性克隆。通過對 PSTVd-IM的序列分析，選取 PSTVd-IM的單酶切位點 EagI對 PSTVd-IM進行等長加倍，實現(xiàn)了PSTVd-IM基因組的二倍化，保證了PSTVd-IM起始位點的完整性，為PSTVd-IM的有效復(fù)制奠定了基礎(chǔ)。
　　PSTVd-IM的克隆和序列分析為 PSTVd-IM克隆化