鴨PRLR基因單核苷酸多態(tài)性和拷貝數(shù)變異研究.pdf

1、本研究以臺灣褐色菜鴨為試驗動物，通過 PCR-SSCP測序?qū)ε_灣褐色菜PRLR基因第10外顯子進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測并分析其多態(tài)性與臺灣褐色菜鴨各性狀的關(guān)聯(lián)；通過克隆獲得目的基因和參照基因的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，10倍濃度梯度稀釋后進(jìn)行定量 PCR擴(kuò)增，獲得引物的擴(kuò)增曲線和熔解曲線，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，優(yōu)化擴(kuò)增條件使得目標(biāo)基因和參照基因的引物擴(kuò)增效率一致，最后通過2-ΔΔCt方法對PRLR基因拷貝數(shù)進(jìn)行定量，并分析其多態(tài)性與臺灣褐色菜鴨生產(chǎn)性

2、能的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果如下：
　?。?）在臺灣褐色菜鴨PRLR基因第10外顯子檢測到1個堿基突變(G253A)，存在 BB和Bb兩種基因型，B等位基因頻率為0.7872，b等位基因頻率為0.2128，雜合度為0.3350，多態(tài)信息含量為0.2789，屬于中度多態(tài)；χ2適應(yīng)性檢驗結(jié)果表明 PRLR基因第10外顯子的多態(tài)位點偏離 Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。Bb基因型個體的出生重和300日齡蛋重均顯著高于BB

3、型(P<0.05)，且Bb基因型個體的蛋殼重極顯著高于BB基因型(P<0.01)，
　　（2）以10倍濃度梯度稀釋的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板進(jìn)行熒光定量 PCR擴(kuò)增，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，PRLR和Ldh-B的標(biāo)準(zhǔn)曲線的 R2分別為0.991和0.990，擴(kuò)增效率分別為111.68％和108.429%，斜率分別為-3.070和-3.135，說明PRLR和Ldh-B的擴(kuò)增效率近似一致，可以通過2-ΔΔCt方法對PRLR基因進(jìn)行定