豬卵巢卵母細(xì)胞體外受精的研究.pdf

1、本研究以廢棄豬卵巢為實(shí)驗(yàn)初始材料，用機(jī)械法抽取獲得未成熟卵母細(xì)胞，體外培養(yǎng)成熟后用于體外受精實(shí)驗(yàn)的研究。本文比較了影響豬卵母細(xì)胞體外受精的影響因素，以期能夠進(jìn)一步完善豬胚胎的體外生產(chǎn)體系，為胚胎技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展提供技術(shù)保障。
　　本研究包括以下內(nèi)容：
　?。?）比較在mTBM中添加不同濃度的咖啡因、不同受精時(shí)間及精子上浮時(shí)間對(duì)豬體外受精的影響。
　?。?）比較豬卵母細(xì)胞體外不同成熟時(shí)間、受精過程中顆粒細(xì)胞的存在情況及低

2、氧環(huán)境對(duì)豬體外受精的影響。
　?。?）研究精子獲能液中添加不同濃度的Ionomycin及Ionomycin作用不同時(shí)間對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞體外受精效果的影響。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1.以改良mTBM為基礎(chǔ)液，添加咖啡因?qū)κ芫咛サ穆蚜崖屎湍遗呗视忻黠@的促進(jìn)作用，添加3mmol/L咖啡因組的受精胚胎卵裂率顯著高于添加5mmol/L咖啡因組和未添加咖啡因組(P＜0.05)，且該組的囊胚率最高；精子上浮處理1h組的卵

3、裂率和囊胚率均顯著高于其它實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)；精卵孵育時(shí)間對(duì)受精胚胎卵裂率無(wú)顯著影響(P＞0.05)，隨受精時(shí)間延長(zhǎng)至9h，受精胚胎的囊胚率顯著降低。通過各實(shí)驗(yàn)組比較發(fā)現(xiàn)，受精液中添加3mmol/L咖啡因，精子上浮1.0h，受精6h能得到較好的體外受精結(jié)果。
　　2.體外成熟40～42h組的卵母細(xì)胞體外受精胚胎的卵裂率和囊胚率顯著高于體外成熟培養(yǎng)36～38h組和46～48h組(P＜0.05)；保留2-3層顆粒細(xì)胞組與不脫顆粒細(xì)

4、胞組的受精胚胎卵裂率和囊胚率差異均不顯著(P＞0.05)，且這兩組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯著高于無(wú)顆粒細(xì)胞組(P＜0.05)；就卵裂率和囊胚率而言，5％ CO2組顯著高于10%CO2組和15%CO2組(P＜0.05)。通過對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的比較，卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)40～42h，保留全部顆粒細(xì)胞和氣相環(huán)境為5%CO2能得到較好的體外受精結(jié)果。
　　3.獲能液中添加10μmol/L的Ionomycin能顯著提高受精胚胎的卵裂率和囊胚率(P＜0.05)