遼寧絨山羊卵母細胞體外成熟與體外受精的研究.pdf

1、為探索出一套適宜的遼寧絨山羊卵母細胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)，滿足科研和生產(chǎn)對早期胚胎的需要，本試驗進行了遼寧絨山羊卵泡卵母細胞體外成熟培養(yǎng)和受精的研究。
　　 1.實驗比較了切割法和抽吸法從屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母細胞數(shù)及成熟率。結果表明切割法采集得到的可用卵母細胞數(shù)（2.52枚/卵巢）顯著高于抽吸法(1.80枚/卵巢)(P＜0.05)，但成熟率差異不顯著。在遼寧絨山羊卵母細胞收集中，切割法要優(yōu)于抽吸法。
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2、.實驗檢測了收集的卵中成熟卵所占的比率，根據(jù)卵丘細胞的完整性將收集到的卵分為三組，COCs、COCs1-3和NOs，成熟卵的比率分別為1.19％、2.56％和4.96％，說明收集的卵中會有少量的成熟卵，而裸卵中成熟卵所占的比率最大。
　　 3.遼寧絨山羊卵母細胞IVM條件為:39℃、5％CO2飽和濕度，基礎培養(yǎng)液+10％FCS+10IU/m(l)FSH+20ug/mlLH+25IU/m(l)PMSG;培養(yǎng)22-24h，成熟率可達

3、78.44％，大卵泡卵母細胞成熟率達85.42％的，這與其他山羊相似。
　　 4.實驗將卵母細胞體外培養(yǎng)16h、18h、20h、24h、26h，成熟率分別為57.90％、70.02％、73.59％、75.40％、76.66％，隨培養(yǎng)時間延長成熟率逐步升高，培養(yǎng)16h的成熟率顯著低于18-26h(P＜0.05)，而培養(yǎng)24h和26h的受精率和卵裂率最高，說明遼寧絨山羊卵母細胞體外培養(yǎng)18h基本達到核成熟，而體外培養(yǎng)24-26h可達

4、胞質成熟，能提高成熟率和受精率。
　　 5.實驗用血清培養(yǎng)基和無血清基培養(yǎng)卵母細胞，血清培養(yǎng)基的成熟率(78.44％)略高于無血清培養(yǎng)基(74.10％)，但差異不顯著(P＞0.05)。說明在遼寧絨山羊可用無血清培養(yǎng)基進行卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)。
　　 6.遼寧絨山羊卵母細胞IVF時，懸浮法適合于細管凍精中高活力精子的獲取;IVF條件為:38.5℃、5％CO2飽和濕度，精子洗滌液和受精液采用mTyrode'液，獲能液采用m

5、Tyrode'液+20μg/ml肝素鈉，受精卵培養(yǎng)液為基礎培養(yǎng)液+20％FCS;受精率和卵裂率可達60.63％和41.75％，這比綿羊的報道要低。
　　 7.實驗比較了卵泡直徑對卵母細胞回收率和體外培養(yǎng)效果的影響，直徑≤2mm、2.1-5mm和5mm以上三類卵泡的回收率分別為56.01％、51.91％和50.57％，可用卵的比率分別為85.42％、72.75％和58.39％，成熟率分別為96.00％、73.42％和54.91％。

6、結果表明:卵母細胞的回收率和可用卵的比率及成熟率均與卵泡直徑呈正相關;直徑2.1-5mm卵泡的卵母細胞受精率和卵裂率分別為59.15％和42.50％，顯著高于直徑＞5mm卵泡和≤2mm卵泡(P＜0.05)，適合體外胚胎的生產(chǎn);直徑≤2mm卵泡的卵母細胞因未發(fā)育充分體外發(fā)育潛能最差;直徑＞5mm卵泡的卵母細胞可能因體外培養(yǎng)成熟過度而老化導致受精率和卵裂率降低。
　　 8.實驗測定了卵丘細胞對卵母細胞體外成熟和受精的影響，第一步，將

7、一部分COCs經(jīng)機械吹打脫除卵丘細胞成為DOs，然后以DOs、DOs(COCs)、DOs(CCs)、COCs四種方式培養(yǎng)，第二步將所獲COCs、COCs1-3、NOs各自單獨培養(yǎng)。結果表明，COCs組的成熟率、受精率和卵裂率分別為82.85％、60.63％和41.75％，極顯著高于其它三組(P＜0.01)，卵丘細胞的存在有利于卵母細胞體外成熟和隨后的發(fā)育，COCs組成熟率、受精率和卵裂率分別為83.25％、59.43％和42.50％，顯