LPS誘導(dǎo)雞幾個(gè)炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控研究.pdf

1、雞大腸桿菌病是影響禽業(yè)生產(chǎn)的主要疾病之一，能夠引起不同品系、不同日齡雞多種組織臟器發(fā)生炎癥反應(yīng)，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。本研究以大腸桿菌脂多糖（LPS）作用于海蘭褐雛雞、AA+肉雛雞以及成年產(chǎn)蛋母雞，分析炎癥反應(yīng)相關(guān)基因akirin2、PPARγ、NYGGF4以及miRNA的表達(dá)特性，為深入理解炎癥反應(yīng)分子機(jī)制和分子診斷標(biāo)記物候選基因的篩選提供理論參考。主要研究方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　為深入研究雛雞炎癥反應(yīng)中相關(guān)基因的表達(dá)特性

2、和調(diào)控關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)分別以AA+肉仔雞和海蘭褐蛋雛雞為研究對(duì)象，采用LPS腹腔接種雛雞，72h后收集血液、肝臟、胸腺、法氏囊和脾臟等組織，利用RT-PCR定量分析炎癥相關(guān)基因akirin2、PPARγ和幾種miRNA的轉(zhuǎn)錄活性變化。結(jié)果表明：在LPS接種的肉仔雞中，akirin2和PPARγ基因在肝臟和法氏囊中均顯著下調(diào)（P<0.01）；在LPS接種的海蘭褐雛雞中，akirin2基因在胸腺中表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.01），而PPARγ基因在

3、各組織中表達(dá)均差異不顯著；此外，miR-146a（P<0.05）、miR-21（P<0.01）和miR-155（P<0.01）在LPS接種的2個(gè)品系雛雞肝臟中表達(dá)均顯著下調(diào)。
　　雛雞接種LPS后，在紅細(xì)胞中，海蘭褐雛雞的miR-155、miR-146a、miR-181a和miR-21的表達(dá)活性均降低，而AA+肉雞卻呈現(xiàn)相反的表達(dá)趨勢。在白細(xì)胞中，miR-155和miR-21表達(dá)均上調(diào)，其中，miR-146a和miR-181a在海

4、蘭褐雞中均顯著下調(diào)（P<0.05），但在AA+肉雞中均顯著上調(diào)（P<0.05）。在血漿中，2個(gè)品系雛雞的miR-146a和miR-181a表達(dá)活性均顯著下調(diào)（P<0.05）。
　　為深入研究雞NYGGF4基因的功能，首先對(duì)四個(gè)品系雞的NYGGF4基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，然后分析該基因的組織表達(dá)特性，最后驗(yàn)證該基因是否與炎癥反應(yīng)相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在四個(gè)品系雞NYGGF4基因編碼區(qū)內(nèi)存在8個(gè)SNP位點(diǎn)。14日齡海蘭褐雛雞NYGGF4

5、基因在腦中的表達(dá)量最高，而在AA+肉雞的肺和脂肪組織中表達(dá)量最高，在其他組織中兩個(gè)品系雞都具有相似的表達(dá)特性。在炎癥反應(yīng)中，NYGGF4基因在海蘭褐雞和AA+肉雞的肝臟和法氏囊中的表達(dá)活性表現(xiàn)出相反的變化。
　　為深入研究成雞輸卵管炎的分子機(jī)制，本研究利用LPS制備海蘭褐成年母雞泄殖腔上行性感染急性炎癥反應(yīng)模型，并定量分析炎性組織相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄活性變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：正常母雞akirin2基因在輸卵管各區(qū)段均高表達(dá)，而PPARγ基

6、因僅在陰道和卵巢組織中具有較高表達(dá)活性。炎癥反應(yīng)中，akirin2基因在子宮、直腸和盲腸扁桃體中轉(zhuǎn)錄活性均顯著上調(diào)，PPARγ基因僅在子宮中轉(zhuǎn)錄活性顯著上調(diào)（P<0.01），而在直腸（P<0.01）和盲腸扁桃體中轉(zhuǎn)錄活性下調(diào)。
　　本研究表明，akirin2、PPARγ和NYGGF4基因是影響炎癥反應(yīng)的重要調(diào)控基因，研究這些基因在炎癥反應(yīng)中的表達(dá)與調(diào)控關(guān)系，對(duì)于深入理解炎癥反應(yīng)分子機(jī)制具有重要的理論意義。此外，某些miRNAs在炎