雞不同疫苗免疫反應(yīng)中幾個(gè)免疫相關(guān)基因的表達(dá)特性研究.pdf

1、新城疫和禽流感仍是禽業(yè)生產(chǎn)中的兩種主要疫病，病死率高，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，這兩種疫病主要通過疫苗防治，但由于新型病毒不斷出現(xiàn)，而且臨床免疫實(shí)踐中常出現(xiàn)免疫效果不好、免疫耐受和免疫失敗等問題，所以深入研究免疫反應(yīng)的分子作用機(jī)制和開發(fā)實(shí)用可行免疫效果早期診斷方法，可能對(duì)解決這些問題具有理論和實(shí)踐意義。本研究以新城疫疫苗（Ⅳ系Lasota株）和禽流感疫苗（H9亞型，SS株）免疫雛雞，分析疫苗免疫后的天然免疫階段和特異性免疫階段中免

2、疫相關(guān)基因akirin2、miR-155和SMS1的表達(dá)特性，主要研究方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　為深入研究疫苗免疫雛雞后免疫反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)特性與調(diào)控關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)以11日齡海蘭褐雛雞作為研究對(duì)象，采用新城疫疫苗和禽流感疫苗分別免疫雛雞，于疫苗免疫后12h、24h、72h、120h、7d、21d、35d和42d分別收集肝臟、胸腺、法氏囊、脾和血液等組織，利用熒光定量PCR定量分析免疫相關(guān)基因akirin2的轉(zhuǎn)錄活性變化。結(jié)果表明:

3、新城疫疫苗組和禽流感疫苗組抗體變化均在14d時(shí)達(dá)到峰值。在新城疫疫苗組中，akirin2在72h時(shí)在肝臟、胸腺和法氏囊中表達(dá)量顯著下調(diào)(P＜0.01)，120h時(shí)在肝臟、胸腺、法氏囊、脾中的表達(dá)量均顯著上調(diào)(P＜0.01);akirin2基因在全血中的120h中表達(dá)量顯著上調(diào)(P＜0.01)。在禽流感疫苗接種組中，akirin2基因在120h時(shí)的各免疫組織中均呈現(xiàn)上調(diào)變化，且在胸腺、法氏囊和脾臟中表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.01);7d時(shí)在肝

4、臟和胸腺中也呈上調(diào)(P＜0.01);有趣的是，在全血中akirin2基因也在120h表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.01)。
　　新城疫疫苗和禽流感疫苗分別免疫雛雞，并在免疫后的12h、24h、72h、120h、7d、21d、35d和42d收集血清，熒光定量PCR定量分析血清中miR-155表達(dá)活性。結(jié)果表明:在新城疫疫苗免疫后120h時(shí)的特異性免疫應(yīng)答早期階段，血清miR-155的表達(dá)活性顯著上調(diào)至峰值(P＜0.01);禽流感疫苗免疫組血

5、清miR-155表達(dá)活性在免疫后120h時(shí)也顯著上調(diào)至峰值(P＜0.01)。
　　為深入研究雞SMS1基因的功能，本實(shí)驗(yàn)首先克隆了AA+肉雞和三黃雞兩個(gè)品系雞的SMS1全長(zhǎng)編碼序列，并對(duì)四個(gè)品系雞（紅原雞、海蘭褐、AA+和三黃雞）的SMS1基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，其次分析該基因的組織表達(dá)特性，最后驗(yàn)證該基因是否與免疫反應(yīng)相關(guān)。結(jié)果表明:SMS1基因的編碼區(qū)在四個(gè)品系雞間存在5個(gè)SNP位點(diǎn)。14日齡海蘭褐雛雞和三黃雞SMS1基因在血

6、中的表達(dá)量均最高，而在其它組織中均呈現(xiàn)低表達(dá)量。在新城疫疫苗疫組中，SMS1基因在120h和21d的雛雞肝臟中表達(dá)量均呈現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.01)，而在血中表現(xiàn)為120h表達(dá)量微下調(diào)，21d時(shí)表達(dá)量微上調(diào);在禽流感疫苗免疫組中，SMS1基因在雛雞肝臟的120h時(shí)表達(dá)量也顯著上調(diào)(P＜0.01)，21d時(shí)表達(dá)量則為顯著下調(diào)(P＜0.01)，而血中SMS1基因在120h時(shí)表達(dá)量略有降低，21d時(shí)則表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P＜0.05)。