西瓜嗜酸菌致病相關(guān)基因的篩選及功能分析.pdf

1、瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑?。╞acterial fruit blotch，簡(jiǎn)稱BFB），主要危害西瓜、甜瓜，引起葉斑或葉枯，造成果實(shí)腐爛，導(dǎo)致大量減產(chǎn)，嚴(yán)重時(shí)甚至絕收；其病原為西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)，被國(guó)際規(guī)定為檢疫性有害生物之一。然而，目前對(duì)此病菌致病機(jī)制的探究相對(duì)來(lái)說(shuō)較少，因此本研究的主要目標(biāo)是找出以及克隆致病相關(guān)基因，并對(duì)其功能進(jìn)行分析。
　　從本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的西瓜嗜酸菌突變體文庫(kù)中活化出1468株突變體作

2、為出發(fā)菌，經(jīng)過(guò)兩輪的西瓜果實(shí)致病性測(cè)定，獲得了215株致病性喪失或明顯下降的突變體；對(duì)1468株突變體進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)131株突變體顏色發(fā)生了變化，160株突變體形態(tài)發(fā)生改變。在西瓜果實(shí)上致病性喪失的127株突變體中，83.5％的突變體顏色發(fā)生改變，85.8%的突變體形態(tài)發(fā)生了變化，然而致病性顯著下降的88株突變體與其顏色和形態(tài)沒(méi)有明顯的相關(guān)性。對(duì)致病力喪失或顯著減弱以及顏色和（或）形態(tài)有變化的50株突變體進(jìn)行甜瓜浸種試驗(yàn)，從中挑出16株

3、致病力喪失或減弱的突變體進(jìn)行西瓜摩擦接種試驗(yàn)，篩選出11株突變體進(jìn)行亞克隆，得到了9個(gè)相關(guān)基因。
　　利用三親雜交的方法，構(gòu)建其中5個(gè)突變體的互補(bǔ)菌株，這些突變體被插入的基因分別為：transcriptional regulator AraC family，HrpB；hypothetical protein；DNA-3-methyladenine glycosylase I；L-threonine aldolase；pilus r

4、etraction ATPase，PilT。將野生菌A13和3號(hào)，5株突變體（195、462、944、X484、X522）以及5株互補(bǔ)菌株（195hb、462hb、944hb、X484hb、X522hb）的過(guò)敏性反應(yīng)、致病性、形態(tài)特征、顏色顯示、生長(zhǎng)能力、群體感應(yīng)信號(hào)、生物膜等進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)互補(bǔ)菌株195hb基本恢復(fù)了過(guò)敏反應(yīng)、致病能力以及生物膜形成能力；菌株944hb恢復(fù)了游動(dòng)能力；菌株X522hb部分恢復(fù)了致病能力；其余互補(bǔ)菌株