蘿卜蚜EβF結(jié)合蛋白基因的克隆、序列分析及組織定位.pdf

1、嗅覺系統(tǒng)，是感受化學(xué)通訊的最主要的生理系統(tǒng)。昆蟲借助靈敏的嗅覺可對環(huán)境中各類信息線索進(jìn)行有效識別，從而準(zhǔn)確獲悉食物和配偶的方位并躲避捕食者的傷害。蚜蟲報警激素E-β-法(呢)烯(EβF)是蚜蟲嗅覺分子機(jī)制研究領(lǐng)域重要研究對象。已有報道豌豆蚜的氣味結(jié)合蛋白ApisOBP3與ApisOBP7能夠特異性的結(jié)合EβF，因此OBP3與OBP7被認(rèn)為是蚜蟲感知EβF的氣味結(jié)合蛋白。OBPs在蚜蟲中具有的高度保守性，也說明該蛋白在蚜蟲的嗅覺感受過程中

2、具有十分重要的生理功能。開展蚜蟲EβF感受機(jī)制的研究，對了解報警信息素驅(qū)避蚜蟲的作用機(jī)理、開發(fā)基于EβF的“推-拉技術(shù)”的害蟲綜合治理策略具有重要的理論與應(yīng)用價值。蘿卜蚜作為蔬菜上的重要害蟲，它對EβF的特殊反應(yīng)引起我們的重視。本研究以對EβF反應(yīng)不敏感的蘿卜蚜為實驗對象，利用ApisOBP3和ApisOBP7的cDNA序列設(shè)計引物，檢測蘿卜蚜體內(nèi)OBP3與OBP7的表達(dá)情況，對這2個基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析及其在蘿卜蚜不同部位和齡期表

3、達(dá)譜的分析。
　　1.通過基因克隆實驗，獲得了LeryOBP3(KJ703012)、LeryOBP7(KJ703013)的全長基因序列。在mRNA水平上鑒定與EβF具有親和能力的OBP3、OBP7在蘿卜蚜中有表達(dá)。LeryOBP3基因序列長度為357bp，編碼118個氨基酸;LeryOBP7基因序列長度為468bp，編碼155個氨基酸。蘿卜蚜本身對EβF不敏感，但其機(jī)體內(nèi)存在識別EβF的機(jī)制，可能利用EβF的有無來區(qū)分同類和寄主植

4、物。
　　2.兩個基因序列與豌豆蚜等其他蚜蟲對比有較高的相似性。LeryOBP3、LeryOBP7基因序列符合氣味結(jié)合蛋白的典型特征，序列比對顯示LeryOBP3和LeryOBP7與其他蚜蟲OBP3、OBP7序列相似性分別為94％、85％。說明了蘿卜蚜中的LeryOBPs基因既符合蚜蟲OBPs所應(yīng)有的結(jié)構(gòu)和功能特點，又說明了蘿卜蚜與其他蚜蟲在親緣關(guān)系上的具有一定的差異性。
　　3.利用實時熒光定量技術(shù)對蘿卜蚜無翅成蚜2個基因

5、(LeryOBP3、LeryOBP7)進(jìn)行組織定位分析，結(jié)果表明，LeryOBP3與LeryOBP7均在觸角有表達(dá)，說明兩種蛋白可能參與蘿卜蚜的嗅覺識別過程。LeryOBP3在足中表達(dá)量較高，暗示它發(fā)揮特殊的嗅覺功能;而LeryOBP7主要表達(dá)于觸角組織中。在分析蘿卜蚜氣味結(jié)合蛋白基因在不同發(fā)育期的表達(dá)，這2個基因在蘿卜蚜若蚜的前4個齡期的表達(dá)量總體上差別不大，而在成蟲期表達(dá)量出現(xiàn)一個表達(dá)量高峰。反映出這2種蛋白在蘿卜蚜成蟲期的寄主搜尋