TcLr35小麥中NBS類抗病基因同源序列的分離及鑒定.pdf

1、小麥葉銹病是我國小麥生產(chǎn)中的主要病害之一，選育抗病品種是防治小麥葉銹病最經(jīng)濟(jì)有效的途徑。發(fā)掘抗葉銹病相關(guān)基因及其緊密連鎖的分子標(biāo)記，是進(jìn)行基因聚合、基因布局和多系品種選育的關(guān)鍵。本研究利用NBS profiling技術(shù)和抗病基因同源序列(RGA)法在TcLr35等小麥抗葉銹病近等基因系材料中分離NBS-LRR類抗病基因同源序列。主要研究內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面:
　　 1.以小麥抗葉銹病近等基因系TcLr35和感病親本Thatche

2、r為材料，分別在基因組DNA和cDNA中成功構(gòu)建了NBS profiling體系。
　　 2.選取15個(gè)回交6代小麥抗葉銹病近等基因系(NILs)及其感病親本Thatcher基因組DNA為模板，4種限制性內(nèi)切酶(AluⅠ、HaeⅢ、MseⅠ、RsaⅠ)和4種簡并引物(NBS2、NBS3、NBS5、NBS7)共16種酶/引物組合，利用NBS profiling技術(shù)進(jìn)行DNA指紋圖譜分析。結(jié)果表明:MseⅠ/NBS2、MseⅠ/NB

3、S5、MseⅠ/NBS7均得到了較好擴(kuò)增結(jié)果，多態(tài)性檢出率分別為26.4％、26.4％、23.5％; AluⅠ/NBS3、HaeⅢ/NBS3、MseⅠ/NBS3、RsaⅠ/NBS3擴(kuò)增背景一致，在檢測材料間未表現(xiàn)多態(tài)性。
　　 3.選取4種限制性內(nèi)切酶（AluⅠ、HaeⅢ、MseⅠ、RsaⅠ）和13種簡并引物(S1、S2、Ploop4、NBS2、NBS3、NBS5、NBS5a、NBS6、NBS7、NBS9、KIN1、KIN5、G

4、LPL4)共52對酶/引物組合，分別在TcLr35和感病親本Thatcher基因組DNA和cDNA中篩選差異片段，最終在TcLr35中獲得6條特異性條帶。
　　 4.利用抗病基因同源序列(RGA)法和電子克隆在TcLr35小麥中獲得了一條通讀的抗病同源基因，該基因長1419bp，包含1323bp ORF區(qū)，編碼440個(gè)氨基酸，含有NB-ARC保守結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)典型的LRR保守結(jié)構(gòu)域，暫命名為TcLr35-S11A11。系統(tǒng)進(jìn)化樹分